Salut tout le monde
En fait j'ai juste besoin d'un petit renseignement technique:
Comment est-ce que vous utilisez l'iodure de propidium pour une IF (marquage des noyau)?
J'en ai en poudre de chez sigma ou liquide venant d'un kit "apoptosis detection" (à 50 µg/mL)? A votre avis qu'est-ce qui est mieux?
Merci d'avance.
Bonjour,
Vous pouvez utiliser la version liquide. En cytometrie on utilise une concentration entre 5 et 10 ug/ml sur cellules perméabilisées.
Personnellement je préférais utiliser du Hoechst ou du DAPI pour une IF. L'IP s'excite partout (en UV à 488 et dans le vert vers les 530 nm) et il émet sur une bande très large.
Cordialement
J'utilise l'IP liquide, je récupère les cellules, puis le lavage dans le PBS, une resuspension des cellules dans 100µl d’iodure de propidium (5µg iodure de propidium(Sigma) dans un tampon citrate), puis dans 200 µl de tampon citrate (3,4 mM de citrate de sodium, 0,1% TRITON/PBS). C'est pour analyser le cycle cellulaire.
L'IP marche bien et très facile pour voir s'il y a de l'apoptose, mais il faut bien choisir le nombre de cellules au départ, c'est en fonction du type et de la nature des cellules, si elles poussent trop vite ou non.
Vous analysez en FACS sur le logiciel Cellquest
Je rejoins sansplomb. Vous vous embêtez pour rien. Le DAPI sera très bien par exemple.
Cordialement,
piwi
Je sers la science et c'est ma joie.... Il parait.
