Dosage de la trypsine
Bonjour à tous,
J'aurais besoin de vous pour le dosage de la trypsine pour un contrendu à rendre:
pourquoi diluer la trypsine dans le Tris HCL PH 8.5?j'ai quelques idées mais c'est pas encore clair
on dose la trypsine par le pnitrophenol?
j'ai le mecanisme mais je ne le comprends pas!!!!!!
j'attends vos reactions
merci
Monka
Bonsoir,
Le Tris HCL est un tampon. Cela sert donc à éviter de trop grosse variation du pH durant la manipulation.
Pour le reste de la question, je ne sais pas répondre, désolé.
Euh...la trypsine c'est une protéase, alors pourquoi la doser avec du p-nitrophénol? Elle est capable de l'hydrolyser aussi?
Re : Dosage de la trypsine
je me suis mal exprimée , la methode consiste sur la pguanidobenzoylation rapide et stoechiometrique de la trypsine par le pnitrophenyl p'-guanidobenzoate NPGB sur la mesure spectrophotometrique du chromophore libéré le p-nitrophenol.
Donc la concentration de la trypsine active est equivalente à la quantite de phenol libéré;
On prepare 4 concentrations de trypsine dans du tris HCL
On injecte le NPGB juste avant de mesurer l'absorbance. On declenche le chrono et toute les minutes pendant 5min on relève l'absorbance par spectro.
On le fait pour les 4 concentrations. On trace la courbe abs en fonction du temps.On extrapole au zero donc j'ai l'absorbance au temps zero .
On a aussi préparé deux concentrations de phenol + Tris HCl Ph 8.5 dont on a mesure l'absorbance et deduit le coef d'absorbance spe et molaire.
Avec ces informations je dois en deduire une absorbance corrigée au temps 0? et la concentration de trypsine active pour chaque concentration?
Je ne sais pas si mes calculs sont bons mais plus la concentration en trypsine initiale augmente plus la concentration de trypsine active diminue alors pourquoi???
Je sais c'est long merci pour ceux qu'ont reussi à finir tout ça
A vous
Monka
