Caractérisation d'enzymes

[calypso26]

Bonjour,
j'aurais grand besoin d'aide pour des techniques de biochimie... J'aimerais connaitre la démarche permettant de caractériser une enzyme sur le plan génétique et biochimique, sans passer par des banques d'EST. Il faudrait surement d'abord avoir la séquence primaire de l'enzyme (obtenue par spectro de masse ?), puis faire de la RT-PCR. Une fois qu'on a l'ADNc, il faudrait faire une protéine recombinante que l'on exprime dans un système hétérologue, et également faire de la complémentation de mutants pour confirmer que le gène code bien l'enzyme voulue. Est ce que je suis sur la bonne voie ? J'ai juste une idée des grandes lignes, après pour les techniques plus dans le détail je suis perdue...
Merci infiniment de votre aide !
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[Vinc]

Bonjour!
Il y a beaucoup de choses mélangées ici.
Reprenons : quelle est précisemment votre question?

V.

[piwi]

0ui je crois aussi qu'il faudrait effectivement mieux préciser votre question. Non pas que vous soyez confuse mais on ne comprend pas bien ce que vous cherchez à faire précisément.
Vous cherchez à caractériser une enzyme connue? De fonction connue?

Cordialement,
piwi

[calypso26]

Bonjour,
effectivement je pense ne pas avoir été très claire... Concrètement, je souhaiterais obtenir des ADNc codant des enzymes dont on connait les substrats et les produits. J'aurais voulu travailler à partir d'une base d'EST, mais pour ma plante il n'existe encore aucune EST. Je pense qu'il faudrait donc que je me tourne vers des méthodes de purification d'enzyme etc, et c'est sur cet enchainement de techniques que j'aurais aimé avoir des informations. J'espère avoir mieux défini les choses !
Merci beaucoup !

[A voir en vidéo sur Futura]