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A propos des tampons utilisés lors de la PCR



  1. #1
    Marina dsf

    A propos des tampons utilisés lors de la PCR


    ------

    Ma question concerne le protocole et le rôle des différents tampons et autres qu'on ajoute.
    - Protéinase K ---> Digestion des prot membranaire.
    - EDTA ---> Chelateur d'ions divalents qui permet d'inhiber les nucléases
    - Phénol/chloroforme ---> pour isoler l'ADN des autres compos qui passeront dans la phase orga.
    - Silice ---> Qui peut remplacer le melange Phenol/chloroforme car il fixe sélectivement l'ADN en presence de fort concentration saline. Le Mg2+ permettant le pontage entre l'ADN ( - ) et la Silice ( - )

    Mais par contre:
    tampon AL
    tampon AW1 et AW2...
    SDS et Tris-HCl sont des détergents tous les deux il me semble mais ont ils les même mode d'action?

    Merci d'éclairer ma lanterne s'il vous plait

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  4. #2
    piwi

    Re : A propos des tampons utilisés lors de la PCR

    J'ai du mal à vraiment comprendre votre question.
    Que voulez vous savoir exactement?

    Sinon SDS est un détergeant mais le tris n'en est pas un. C'est un tampon.
    Je sers la science et c'est ma joie.... Il parait.

  5. #3
    Zellus

    Re : A propos des tampons utilisés lors de la PCR

    Salut,

    Ca ressemble plus à une extraction d'ADN qu'à une PCR ce dont tu parles mais bon. Les tampons AL, AW1 et AW2 sont sans doute les noms donnés par la société qui vous a vendu le kit de purification. Mais généralement les sociétés qui vendent ces produits n'en donnent pas la composition. Par contre il doit y avoir le rôle de ces tampons dans le "mode d'emploi" fourni avec.

  6. #4
    Marina dsf

    Re : A propos des tampons utilisés lors de la PCR

    Oui voilà en fait ma question était de savoir quel rôle avaient ces différents composés lors de l'extraction d'ADN que l'on fait avant de procéder a une PCR.
    Mais vous y avez répondu, ce sont simplement des tampons.

    Désolée pour la mauvaise formulation de ma question

    Et merci d'y avoir répondu.

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  8. #5
    Moumoutte

    Re : A propos des tampons utilisés lors de la PCR

    Bonjour,

    oui zellus à raison, ce sont les noms donnés à des réactifs de kit d'extraction.

    De mémoire, il me semble que les tampons AW1 et AW2 contiennent un sel chaotropique, le thiocyanate de guanidium (GTC) qui a la faculté de lier les acides nucléiques en milieu acide et alcoolique par adsorption sur la silice.
    Le tampon AL doit être un tampon de lavage (mais pas sûr)

    cordialement

  9. #6
    Marina dsf

    Re : A propos des tampons utilisés lors de la PCR

    Merci beaucoup a tous !

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