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ADN, chromatine, ... Mises en évidence expérimentales.



  1. #1
    Guillaume69

    ADN, chromatine, ... Mises en évidence expérimentales.

    Bonjour,

    Un certain nombre d'éléments structuraux vus en première année nous ont été présentés "tels quels", sans les mises en évidences expérimentales qui permettent de les montrer.
    J'aurais besoin de quelques principes expérimentaux, indispensables en synthèse ou en analyse de documents.

    Pourriez vous répondre à ces questions ?
    Je sais que j'en ai beaucoup, mais si au moins quelques unes étaient éclaircies, ce serait un grand pas.

    A propos de la structure de l'ADN...
    1/On nous a présenté les conformations en hélice B (celle de watson et crick), en hélice A et en hélice Z. Les deux dernières peuvent-elles se mettre en évidence de la même manière, par diffraction aux rayons X ?
    2/A ce propos, comment se fait il que l'extraction de l'ADN, qui utilise quand même des procédés assez "violents" il me semble : choc osmotique+centrifugation, ou détergent+sels+réaction de précipitation), ne change pas la conformation qu'il avait initialement dans la cellule ?

    La mise en évidence du rôle du noyau
    3/Là c'est une expérience que j'ai mal comprise. On travaille sur des amibes, unicellulaires. On nous dit que le noyau est dans le pied et qu'il y a un chapeau, puis qu'on sectionne entre le pied et le chapeau...
    Donc : l'unique cellule est littéralement "ouverte". Selon moi, elle devrait se vider de son contenu et on n'en parle plus

    La structure des histones
    4/ Comment mettre en évidence la liaison de l'ADN aux histones, et les différents niveau de compaction des histones ?
    Pour les niveaux de compactions les plus élevés, qui sont de l'ordre de la centaine de nm, je comprend que l'electronographie soit suffisante, mais pour ce qui est des fibres chromatiniennes par exemple ?
    Là encore, ce n'est pas un protocole précis qui m'intéresse, mais une idée de démarche. Pour un complexe récepteur-ligand, enzyme-ligand je sais qu'on peut utiliser la spectroscopie, ici aussi ?

    L'organisation des gènes chez les eucaryotes
    5/Comment mettre en évidence qu'une fraction d'ADN est non codante, puisqu'elle ne l'est justement pas ?
    Je pensais à une hybridation du brin transcrit avec un ARN pré-messager (pas d'excision des introns ni raboutage des exons)

    Rechercher le phénotype impliqué par l'expression d'un gène.
    6/ Dans d'autres chapitres, on nous parle souvent de l'observation d'un gène pour lequel on a forcé l'expression : mais comment procède-ton : on injecte de l'ADN répliqué (par PCR, ou autre technique de génie génétique) dans un noyau de cellule ?
    7/On peut aussi observer le phénotype impliqué l'expression d'un mutant. Pour cela, faut-il avoir "la chance" de disposer d'un mutant, ou peut-on provoquer une mutation d'un gène, ou rendre inactif un gène d'une cellule encore en activité ?

    A propos des virus
    8/Ils sont de l'ordre de la centaine de nm. Comment les observent-on ? MET et MEB uniquement ?

    -----


  2. #2
    Guitoux

    Re : ADN, chromatine, ... Mises en évidence expérimentales.

    Bonjour, voici quelques éléments de réponse que je peux t'apporter :

    1/On nous a présenté les conformations en hélice B (celle de watson et crick), en hélice A et en hélice Z. Les deux dernières peuvent-elles se mettre en évidence de la même manière, par diffraction aux rayons X ?
    Oui et d'ailleurs les images que tu as pu observer de diffraction aux rayons X sont vraiment simplifiées. La diffraction donne beaucoup d'informations.

    4/ Comment mettre en évidence la liaison de l'ADN aux histones, et les différents niveau de compaction des histones ?
    Pour les niveaux de compactions les plus élevés, qui sont de l'ordre de la centaine de nm, je comprend que l'electronographie soit suffisante, mais pour ce qui est des fibres chromatiniennes par exemple ?
    Là encore, ce n'est pas un protocole précis qui m'intéresse, mais une idée de démarche. Pour un complexe récepteur-ligand, enzyme-ligand je sais qu'on peut utiliser la spectroscopie, ici aussi
    Au microscope électronique on peut obtenir une image de la structure en collier de perles c'est-à-dire que les octomères d'histones sont séparés les uns des autres.

    5/Comment mettre en évidence qu'une fraction d'ADN est non codante, puisqu'elle ne l'est justement pas ?
    Je pensais à une hybridation du brin transcrit avec un ARN pré-messager (pas d'excision des introns ni raboutage des exons)
    Heu non justement, on prend de l'ARN cytosolique donc mature qu'on hybride avec de l'ADN et les boucles d'ADN qui ne s'apparient pas sont les régions des introns. Ou bien j'ai mal compris la question ?

    Les virus :Ils sont de l'ordre de la centaine de nm. Comment les observent-on ? MET et MEB uniquement ?
    non on peut aussi utiliser la diffraction aux rayons X (quand je dis que ça sert à tout ce machin là)

    Bon j'espère que j'ai précisé quelques trucs et que mon intervention n'était pas inutile ...

  3. #3
    Guillaume69

    Re : ADN, chromatine, ... Mises en évidence expérimentales.

    Bonjour,

    Ton intervention est très utile !

    on prend de l'ARN cytosolique donc mature qu'on hybride avec de l'ADN et les boucles d'ADN qui ne s'apparient pas sont les régions des introns. Ou bien j'ai mal compris la question ?
    Je ne veux pas mettre en évidence les introns, qui sont codés mais éliminés lors de la maturation de l'ARNpré-messager par le mécanisme d'excision, mais les séquences non codantes : séquences régulatrices cis, promoteurs de gènes, par exemple...

  4. #4
    Guitoux

    Re : ADN, chromatine, ... Mises en évidence expérimentales.

    ah d'accord, bah j'avoue que là j'ai pas trop d'infos

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