Bonjour tout le monde,
Je suis actuellement entrain d'effectuer une modification de BAC par recombinaison homologue dans la bactérie DH10B. Je viens de transformer mes bactéries qui contiennent le BAC avec le plasmide contenant la séquence que je veux insérer dans ce BAC. Après l'electroporation, mes bactéries ont poussées sur un milieu contenant des antibiotiques appropriés montrant que certaines ont bien intégrer le plasmide et que celui ci a du s'intégrer dans le BAC (le plasmide contient une origine de réplication qui ne lui permet pas de se répliquer de façon autonome dans ce type de bactéries).
Pour en arriver a ma question : j'ai étalé les bactéries sur des boites LB-Agar-Antibio, j'ai fait des prep sur 12 colonies. J'ai testé la bonne insertion de mon ADN dans le BAC par PCR (avec des primers designés spécialement). Le problème est que j'ai tout et n'importe quoi. Cela me donne l'impression que mes colonies sont hétérogènes et contiennent différentes populations de bactéries. Est ce donc possible qu'une colonie récupérée sur un milieu LB Agar ne soit pas pure???
Merci d'avance pour votre aide!
Nodo
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