lyse cellulaire

[invitede7836e3]

bonjour,

svp, je veux faire l'extraction des antigènes de secrétion à partir d'une culture cellulaire d'un parasite intracellulaire, et je veux faire la rupture des membranes sans les lyser afin de les éliminer par centrifugation.

merci
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[invite71f23525]

Bonjour,

Pourquoi voulez-vous lyser les cellules étant donné que ce qui vous intéresse sont les antigènes de sécrétion? Normalement quand on regarde des protéines/antigènes sécrétés, on culote les cellules et on récupère le surnageant, c'est tout.

Greg

[invitede7836e3]

Bonjour,

Pourquoi voulez-vous lyser les cellules étant donné que ce qui vous intéresse sont les antigènes de sécrétion? Normalement quand on regarde des protéines/antigènes sécrétés, on culote les cellules et on récupère le surnageant, c'est tout.

Greg

mon problème c'est que je cherche tous les antigènes pouvant etre secrétés par le parasite. si je récupère le milieu j'aurai à différencier entre les protéines du parasite, celles de la cellule hôte et celles du milieu de culture (j'utilise le SVF).
quesque vous en pensez?
sachez que je suis débutante en biochimie
merci

[invite71f23525]

Que voulez-vous faire avec les antigènes extraits :dosage? Western Blot? Spectrométrie de masse? Purification?

Greg

[A voir en vidéo sur Futura]

[invitede7836e3]

Que voulez-vous faire avec les antigènes extraits :dosage? Western Blot? Spectrométrie de masse? Purification?

Greg

je vais faire un western blot avec le sérum contenant les anticorps après infection d'un animal et par là je détermine les protéines immunogènes

[invite71f23525]

Si vous faites un western blot avec un pool d'anticorps dirigés contre des antigènes du parasite, votre expérience sera spécifique de ces antigènes là. Les antigènes de l'hôte ne seront pas détectés vu que les anticorps proviennent de l'hôte en question (sinon ce seraient des anticorps auto-immuns). Donc prélever le surnageant sera suffisant. Vous déposer le surnageant sur gel SDS-PAGE et vous faites votre western blot.

Greg

[invitede7836e3]

Si vous faites un western blot avec un pool d'anticorps dirigés contre des antigènes du parasite, votre expérience sera spécifique de ces antigènes là. Les antigènes de l'hôte ne seront pas détectés vu que les anticorps proviennent de l'hôte en question (sinon ce seraient des anticorps auto-immuns). Donc prélever le surnageant sera suffisant. Vous déposer le surnageant sur gel SDS-PAGE et vous faites votre western blot.

Greg

si simple que ça

merci beaucouuuuuuuuuuup