Contamination amorce en AFLP

[invite364d48af]

Bonjour,
je fais actuellement beaucoup d'AFLP avec différents couples d'amorces Eco/Mse mais j'ai un soucis avec un couple d'amorce avec lequel mon témoin négatif ressort contaminé (bandes lors du génotypage) j'ai tout essayé : recommander des amorces, décontamination complète paillasse, pipettes, machine à PCR, travail sous hôte, changement de salle PCR etc...) l'amorce qui me pose problème c'est EcoCAG alors que toutes mes autres amorces Eco sont du type EcoA.. la seule qui ne fonctionne pas est celle commençant par C.Même en ayant recommandé cette amorce et en ayant pris toutes les précautions je n'arrive pas à obtenir un témoin nég!

Quelqu'un peut il me dire ce que je peux faire de plus?

Merci
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[invitec1eb4a97]

t'as mis quoi dans ton témoin négatif?

[invite364d48af]

tout sauf mon ADN! j'ai mis de l'eau ultra pure et le reste de mon mix... pour toutes mes autres manip je fais la même chose mais c'est seulement avec ce couple d'amorces que j'ai un problème

[invitec1eb4a97]

grand mystère...
elles sont longues tes amorces?

[A voir en vidéo sur Futura]

[invite364d48af]

Même longueur que celles avec lesquelles je n'ai pas de problème...la seule chose qui change c'est EcoC.. à la place de EcoA.. (amorce +3nuléotides) l'autre reste inchangée MseCTA????....

[invite364d48af]

Je précise que cela a fonctionné au tout début sur une population mais à partir du moment où ça a foiré plus rien depuis même avec des amorces recommandées auprès du fournisseur???
Aérosol??? pourtant tout a été décontaminé, et j'ai changé de salle et travaillé sous hote

[invitec1eb4a97]

tu n'as pas changé de protocole entre temps?
t'as tout changé? adaptateur, enzymes...