technique de la Cytométrie en flux FACS
Salut
j'ai une petite question sur la compensation effectuée sur les résultats obtenus via la cytométrie en flux.
En fait je sais qu'on utilise la compensation pour enlever le chevauchement des spectres d'émission des fluorochromes.
Ma question ça serait quoi la conséquence d'analyser des résultats non compensés.
J e vous remercie Beaucoup pour votre aide.
Bonjour,
Cela va dépendre du choix des fluorochromes utilisés. Un double marquage avec FITC et APC ne nécessite pas de compensation. Dans ce cas il n'y a pas de problèmes à analyser ce genre de datas.
Par contre si vous utilisés des fluorochromes nécessitant des compensations comme FITC et PE et bien d'autres, alors le soucis va se poser. Il vous sera pratiquement impossible d'obtenir un résultat précis, vous allez augmenter le "bruit de fond" un peu partout, ce qui vous empêchera d'analyser les antigènes faiblement exprimés par exemple. Les populations positives pour plusieurs antigènes seront très dures à séparer et mesurer. A mon avis, le résultat sera d'autant plus faux que le nombre de couleurs sera important. Par exemple analyser un 6 couleurs ou plus sans compensations ne peut donner que des résultats faux. A l'opposé un simple marquage ne nécessite jamais de compensation bien évidement.
cordialement
Merci beaucoup pour ton aide, est ce que tu pourrais stp spécifier ce que tu veux dire par bruit de fond.
Merci beaucoup.
Bonjour,
j`ai mis en pièce jointe une illustration de datas compensées et sans compensation pour illustrer le "bruit de fond". Cela se caractérise par une moins bonne séparation entre les cellules pos et les neg.
Le déplacement du pic des cellules neg est du au marquage FITC non compensé.
cordialement
