Bonjour à tous.
Je fais un appel à témoins pour rassembler un max d'infos qui pourraient m'aider.
En ce moment j'essaye de produire un ssDNA par PCR asymétrique en utilisant mon fragment purifié comme matrice et qu'une seule amorce.
Les résultats sont assez encourageant car je vois bien ma bande ssDNA : mon fragment purifié fait 300 pb et la bande inférieure est bien du ssDNA (test nuclease S1 effectué). gel 2% agarose.
En gros je fais appel à vous pour savoir si vous avez des astuces pour :
1- améliorer mon rendement de PCR ssDNA ( j'ai fais varier les cycles les concentrations et ca change pas beaucoup ... )
2- une bonne technique de purification de ce ssDNA ( le seul essaie de kit s'est soldé par un echec) les Kit commerciaux affirment que le ssDNA se fixe sur les colonnes mais rien n'est connu quant à l'efficacité ...
Donc voila un peu mes questions, si vous avez des réponses quel qu'elles soient pour m'éviter de perdre du temps ca serai super merci![]()
Bonne continuation.
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