Dosage de protéine / méthode de lowry

[invitea146c6d4]

bonjour,

je dois préparer mon TP dans lequel on va utiliser la méthode de lowry mais on nous a expliqué cette méthode très brièvement et je n'ai pas tout suivi.
je voudrais savoir ce qui fait de cette méthode une méthode indirecte ?
c'est parce qu'on fait deux réactions ?

aussi pourquoi on mesure à 700 ? c'est parce que le mélange est bleu donc absorbe plus au niveau du rouge-orange dont la longueur d'onde est 700nm ?

je dois comparer la méthode de dosage directe avec la méthode de lowry. laquelle est plus précise et pourquoi? (enfin si c'est valable dans tous les cas)
le BSA est il un bon standard pour l'une et/ou l'autre méthode?

merci d'avance.
-----

[invite6487dc7f]

Salut,
J'ai du mal a saisir le sens de directe/indirecte mais en improvisant je dirais indirecte car tu as besoin d'une réaction pour révéler tes protéines.

Je mesure à 680, mais de toute facon je pense pas que ca fasse de grande différences. On est en plein dans le rouge à cette longueur d'onde, donc pour du bleu c'est pas mal, et puis de toute façon vaux mieux faire ce qu'on dit dans ces cas là. Les mecs qui ont mis au point cette technique on fait énormément de tests pour trouver la meilleur (qui n'est pas forcément celle ou cela absorbe le plus).

Méthode de mesure directe, c'est dans l'UV à 280? Laquelle est plus précise, selon toi? Es ce qu'on s'emmerderait a faire du lowry si c'était moins précis?
Pourquoi, tu un réaction très colorée, qui va absorber beaucoup de lumière pour peux de molécule initialement. Et le épsilon des acides aminés arômatiques est très faible à 280.

La BSA est généralement la protéine standard qui possède tous les aa en quantité relativement représentative des autres protéines.

[invitea146c6d4]

merci pour ta réponse !

mais concernant le directe et indirect quelqu'un aurait un complément?

[Flyingbike]

direct : tu doses par l'absorption intrinseque de la protéine a 280nm (certains acides aminés absorbant a 280)

indirect : tu doses un composé dont l'absorbance dépend de la quantité de protéine après une réaction

[A voir en vidéo sur Futura]