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dosage d'ADN sans spectrophotomètre



  1. #1
    botrytis

    dosage d'ADN sans spectrophotomètre

    Bonsoir,

    Je souhaiterais savoir si dans le cas où l'on ne dispose pas de spectrophotomètre , serait-il possible de doser la concentration de nos ADN en les faisant migrer avec un ADN de référence dont les bandes ont une concentration connue?

    la métode est-elle viable (car elle n'est pas citée dans la littérature) mais aussi si c'est le cas, serait il possible d'avoir plus de détails ou de liens pour approfondir ma recherche

    merci

    -----


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  3. #2
    Flyingbike

    Re : dosage d'ADN sans spectrophotomètre

    ca se fait, mais c'est tres indicatif. Il faut veiller a faire plusieurs dilutions pour avoir une intensité comparable avec la référence, et surtout comparer un echantillon X avec une référence de taille similaire.

    Ca suffit pour avoir un ordre d'idée (pour les transformations, PCR, ratios de ligation, etc) mais pas pour les études quantitatives.

  4. #3
    botrytis

    Re : dosage d'ADN sans spectrophotomètre

    Bonjour flyingbike. merci pour ta réponse.

    tu dis juste, c'est pour une PCR simple. tu peux me donner plus de tdétails sur les dilutions à effectuer pour ajuster l'échantillon par rapport à l'ADN de référence?

  5. #4
    kamor

    Re : dosage d'ADN sans spectrophotomètre

    Je pense qu'il veut dire qu'il faut que la concentration de ton échantillon doit être compris dans la gamme de concentration de ton marqueur. Si elle est au dessus ou en dessous, tu ne pourras pas calculer sans être certaine du résultat.

  6. #5
    Flyingbike

    Re : dosage d'ADN sans spectrophotomètre

    kamor a lu dans mes pensées ! Il faut que ton produit ait une concentration comparable a celle de ton marqueur, parce que s'il y a un facteur 10, l'oeil ne suffit pas !

  7. A voir en vidéo sur Futura
  8. #6
    kamor

    Re : dosage d'ADN sans spectrophotomètre

    Non non je ne suis pas un clone de The Mentalist, c'est juste que c'est l'un des principes de base de tout dosage par comparaison d'une gamme

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  10. #7
    Zellus

    Re : dosage d'ADN sans spectrophotomètre

    Salut,

    Il existe aussi des marqueurs de taille qui permettent de quantifier ton échantillon.
    Dans tous les cas, je te conseillerais de quantifier les bandes de ton gel avec un logiciel comme ImageJ si tu veux avoir la meilleure approximation possible de ta concentration.

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