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extraction d'ADN



  1. #1
    emilly 2

    extraction d'ADN


    ------

    bonsoir

    j'aime bien vous poser une question très précise en ce qui concerne l'extraction de l'ADN a partir des graines de soja : la quantité d'ADN extraite a partir de 100mg de poudre peut elle atteindre 900 ng /ul ?
    personnellement j'ai obtenu des quantités qui varie de 100 à 900 ng/ul

    Merci

    -----

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  3. #2
    piwi

    Re : extraction d'ADN

    Si vous ne donnez pas de notion de volume il va être très difficile de vous répondre quoi que ce soit.
    Vous comprenez bien que si vous obtenez 1µg/µl dans un volume final de 100µl, c'est mieux qu'une concentration de 10µg/µl dans 5µl.

    Cordialement,
    piwi
    Je sers la science et c'est ma joie.... Il parait.

  4. #3
    emilly 2

    Re : extraction d'ADN

    merci piwi pour votre réponse, mais franchement je n'ai pas compris que-ce que vous voulez dire !!!!
    pour etre plus clair , la quantification je l'ai faite par spectrophotometrie
    c-à-d dosage de la densité optique , puis calcule de la concentration en utilisant la formule :

    ADN (μg / μl)=Do260x 200 (facteur de dilution) x 50 μg / ml x 10-3
    de cette manière j'ai calculé la concentration de mes échantillons

  5. #4
    kamor

    Re : extraction d'ADN

    Si ton volume final de ton extraction est de 2µl, ça fait 1.8µg donc oui.
    Si ton volume final est de 1l par contre, ça fait 900mg.
    Je schématise mais c'est ce que voulait dire piwi.

    Il faut aussi faire attention à la valeur de DO, votre appareil n'est précis que dans une gamme de DO, si elle est trop élevée, vous allez sous estimé et inversement. Les DO >1 sont à rediluer.
    Perso ça m'étonne pas trop, il faut aussi voir avec votre technique d'extraction

  6. #5
    emilly 2

    Re : extraction d'ADN

    salut Kamor

    petite précision , l'ADN absorbe les UV a 260 nm , donc je suis sur de la longueur d'onde que j'ai choisi pour la lecture de la densité optique .De plus je trouve que l'expression de la concentration se fait par microlitre indépendamment du volume final du moment que chaque ul contient une quantité donné d'ADN . J'ai posé ma question parce qu' au niveau du protocole que j'ai utilisé aucune information sur la concentration n'a été indiqué.

  7. A voir en vidéo sur Futura
  8. #6
    piwi

    Re : extraction d'ADN

    Par contre il y a de grandes chances que l'on vous dise quelle quantité d'ADN vous pouvez espérer obtenir à partir d'une quantité de référence de tissu (ex: 100µg à partir de 100mg de tissus de départ).
    Evidemment, si vous ne voulez pas comprendre l'intérêt de prendre en compte le volume final, ça ne va pas être simple de vous y retrouver. Mais là ça vous regarde.

    Cordialement,
    piwi
    Je sers la science et c'est ma joie.... Il parait.

  9. Publicité
  10. #7
    emilly 2

    Re : extraction d'ADN

    heureuse de vous avoir encore une fois piwi, je doit peut être mieux m'expliquer : j'ai extrait mon ADN dans un tube à eppendorff , la dernière étape de l'extraction est de dissoudre l'ADN (petit culot)dans 50 ou 100 ul d'eau distillée stérile ou dans du TE.
    pour faire la quantification , j'ai préparé des dilution puis j'ai lu la, densité optique .En utilisant l'équation cité précédemment j'ai pu calculé la concentration .
    pour toute utilisation ultérieur (PCR) par exemple ,on nous demande de prendre 2ul d'ADN concentré à 10ng/ul c'est pour cela je vous dit que le plus important c'est la concentration dans un volume donné (1ul).

    merci infiniment pour vos intervention

  11. #8
    piwi

    Re : extraction d'ADN

    Ce que vous nous posiez comme question était une question de rendement.
    Vous partez de 100mg vous obtenez entre 0.1 et 0.9µg/µl dans 100µl. Vous avez donc obtenu entre 10 et 90µg totaux. Je ne connais pas trop la biologie végétale mais ça ne me semble pas énorme. C'est cependant bien suffisant pour faire une PCR.

    Cordialement,
    piwi
    Je sers la science et c'est ma joie.... Il parait.

  12. #9
    kamor

    Re : extraction d'ADN

    Et tant qu'on y est sur les précisions, il est exact que le pic d'absorption des acides nucléiques, aussi bien ADN que ARN, est à la longueur d'onde 260nm, mais les protéines absorbent aussi à 260nm même si leur pic est à 280nm. C'est la raison pour laquelle on mesure les deux et que le ratio doit être proche de 2 pour indiquer une bonne pureté en protéines.

    Pour revenir au problème, vous partez d'une quantité et vous nous demandez si une concentration est possible.
    Oui elle peut être possible, mais comme je vous l'ai démontré par mon calcul très exagéré, ça dépend aussi du volume de votre éluat.
    Regardez les bouquins de n'importe quel kit commercial, ils indiqueront une quantité qu'il est possible de récupérer à partir d'une quantité de produit, pas une concentration, car elle est fonction du volume qui est fonction de nos envies.

  13. #10
    emilly 2

    Re : extraction d'ADN

    merci collegues

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