Problème de Taq polymérase.

[invite2ac96057]

Bonsoir,

j'ai fait une manip cet après midi et j'ai eu un petit problème de volume (j'ai mis 10 fois plus de Taq pol que je ne devais en mettre en ne vérifiant pas bien ma pipette ... oui oui quel idiot je sais )
Je me posais la question de savoir ce qui pouvait se passer outre la perte financière de 10 PCR.
Je pense qu'il y aura qu'en même une amplification mais qui sera moins forte que si j'avais mis la bonne concentration en Taq car y aurai compétition ...

Je ne sais pas si mon raisonnement est juste, quelqu'un pourrait-il m'aider à répondre à cette question ou alors un site internet (pas trouvé jusqu'alors ...)

merci d'avance
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[kamor]

Je dirais tu auras peut être plus d'amplicons si tu n'as pas optimisé cet aspect de ton mix PCR, à part ça... Normalement la TAQ n'agit qu'après être fixé sur un double brin d'ADN donc la compétition je vois pas trop. Tu veux dire plusieurs Taq essayant de se fixer aux mêmes sites?

[Flyingbike]

peut etre aussi un tampon de conservation de la taq qui se retrouve trop concentré (glycérol, azide, ...)

[invite2ac96057]

oui c'est exactement à ça que je pensais vu que je n'ai pas mis plus de dNTPs (je me suis rendu compte de mon erreur une fois le thermocycler en marche).
Sinon c'est cool, les réponses sont toujours aussi prompts merci beaucoup de ces précisions

[A voir en vidéo sur Futura]