bonjour à tous
Pour les connaisseurs du domaine de la biologie moléculaire, on dit souvent qu'il faut travailler dans des conditions particulières (le froid surtout) afin d'éviter l'altération des enzymes qu'on utilise . a titre d'exemple la Taq polymérase qui est connu d'être thermorésistante . la question qui me vient toujours en tête est : du moment que la Taq est thermorésistante (jusqu'à 90°C) pourquoi ne resiste t' elle pas à une température de 25°C (température ambiante ) .
elle y résiste, heureusement, sinon la PCR n'existerait pas
Il y a beaucoup de gens paranos dans les labos, cependant la Taq se garde quand même plus longtemps au congelateur qu'a température ambiente.
C'est plus qu'à 25°C les protéases sont actives et pourraient dégrader la Taq, d'où le fait de la mettre à des températures évitant ces réactions. Mais à l'heure actuelle, elle est souvent protégée, et on fait quand même attention à maniper proprement.
C'est aussi qu'a 25C la reaction commence (mais pas dans les bonnes conditions). Ce que tu veux c'est que ta reaction commence quand tous tes composants sont la. Par exemple, pas mal d'enzymes ont une activitee exonuclease en absence de dNTP. Il peut aussi y avoir des hybridations non specifiques etc... Ce n'est pas le genre que tu souhaite dans ton tube PCR.
C'est pour cela qu'il est preconise de travailler dans la glace. Maintenant il y a des enzymes qui ne s'activent que apres passage a 95C pour quelques minutes. L'avantage c'est que tu peux preparer ton mix a 25C.
a+
