Echec de la Transformation Ecoli
J'ai fait 6 transformations sur les Ecoli électrocompétentes hier. Pr controler, j'ai fait un miniprep ,puis déposer l'ADN plasmidique sur gel d'agorose, j'ai trouvé la bonne taille de plasmide, la méthode que j'ai utilisée pr la transformation est L'electroporation, la machine est BioRAD Pulse Controller Gene Pulser
Paramètre : RESISTANCE 200 OHMS
CAPACITANCE 2.5µFD
VOLTAGE 2.5 Volts
la durée d'impulsion pr ces 6 transformations est successivement 2,5 ; 4,4 ; 4,4 ; 4,6 ; 4,3 ; 2,1 Sec. les 2 transformations de 2,5 et 2,1 sec ont fait un Splash, mais le temps d'impulsion est inférieure à 0,5 sec, c'est correct.
En effet , après la transformation, j'ai laissé les bactéries pousser 1 h à 37, puis je les ai étalées dans des boites pétri + Ampicilline ce qui m'a permis la sélection, puis incubation à 37 une nuit, mais aujourd'hui, j'ai aucune colonie.
a priori, les bactéries sont bonnes, car je l'ai utilisée pr un autre transformation le jour d'avant, ça a été marché.
Actuellement, j'ai lancé une digestion enzymatique sur ces plasmides provenant d'un miniprep puis je les déposerai sur gel pr voir la taille exacte , car il y a bcp de formes superenroulé, relaché etc pr un plasmide. j'aurai le résultat dans 5 heures.
J'éspère que ça sera marché, sinon, je ne sais vraiement pas ce qui s'est passé.
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Envoyé par andrewli 
