Western blot methanol

[invite205fe7a3]

bonjour,
pouvais vous me dire quelle est l'utilité de mouiller les membranes PVDF dans du methanol, en fait est ce pour les rendre plus ou moins hydrophobe/philes et quelle est el "mecanisme chimique"?
MERCI à tous
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[Edelweiss68]

Bonjour,

"Le méthanol (contenu dans la solution de transfert) " active " le gel en
enlevant le SDS des protéines et en augmentant la liaison des protéines à la membrane, mais peut
diminuer le transfert de certaines protéines."

Source:http://calamar.univ-ag.fr/deugsv/Doc...TPBiol-LS5.pdf

Cela a l'air bien expliqué, c'est tout le protocole d'un TP dans lequel la technique de Western blot est utilisée.

[invite71f23525]

Non nath parle plutôt de l'étape précédent la constitution du sandwich de transfert. On trempe rapidement la membrane de PVDF dans le méthanol suivi d'un rinçage à l'eau distillée. Avant cette étape, la membrane de PVDF est hydrophobe puisque la plonger directement dans l'eau ne la mouille pas. Je suppose donc que la tremper dans le méthanol doit dissoudre partiellement la surface hydrophobe de la membrane, révélant ainsi les sites hydrophiles permettant à la membrane de ne pas repousser les molécules polaires comme l'eau, et donc de bien faire contact avec le tampon de transfert. De plus, la constitution des membranes de transfert (nitrocellulose et PVDF) ont l'avantage de présenter des sites hydrophiles et des sites hydrophobes, optimisant ainsi leur capacité à fixer les protéines par interactions électrostatiques et hydrophobes, d'où l'intérêt supplémentaire de rendre la membrane de PVDF hydrophile.

Greg