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DO 260/280 et 260/230



  1. #1
    cleville

    DO 260/280 et 260/230


    ------

    Bonjour,
    Je suis en pleine extraction d'ARN a partir d'échantillon vegetaux.
    Les rapports de DO 260/280 sont proches de 2 jusqu'a 2.16
    Les rapports de DO 260/230 sont près de 2 voire jusqu'a 2.29.
    (Quantifiés au nanodrop)

    Je sais que ces rapports permettent de verifier la pureté de l'ARN, mais pourquoi des rapports supérieur à 2? que cela signifient-ils???

    Merci pour votre aide!

    -----

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  3. #2
    ozzypo

    Re : DO 260/280 et 260/230

    Salut, je me posais la même question pour un rapport de lab et avec un ami on est venu à cette conclusion. Les acides nucléiques absorbent la lumière à une longueur d'onde de 260, à 280 se sont les protéines qui absorbe la lumière et à 230 se sont les molécules organiques. Donc, je crois, plus que tu a de contaminat plus que ton ratio est bas.

    S.V.P. corrigez moi ou confirmez ma réponse

  4. #3
    Flyingbike

    Re : DO 260/280 et 260/230

    c'est ça. Ca permet de vérifier que tu n'as pas trop de saloperies dans ton échantillon.

  5. #4
    AstroBax

    Re : DO 260/280 et 260/230

    en effet, c'est ça.
    les acides nucléiques absorbent MAJORITAIREMENT à 260nm
    les protéines absorbent MAJORITAIREMENT à 280nm (à cause des acides aminés aromatiques (Phe, Trp, Tyr)
    les molécules organiques (tampons, etc...) absorbent MAJORITAIREMENT à 230nm.

    C'est pourquoi un mauvais ratio 260/280 (généralement < 1.9) indique une contamination par protéines et un mauvais ratio 260/230 (généralement > 2) indique une contamination par molécules organiques.

    Maintenant si ta question est "Pourquoi on peut pas avoir un rapport de 10'000 si on a pas du tout de contaminant ?", alors là, sauf erreur de ma part, et c'est pourquoi j'ai accentué le "MAJORITAIREMENT", c'est que les acides nucléiques absorbent aussi un petit peu à 230 ou 280, ce qui fait que la mesure de l'absorbtion à 230 ou 280 n'est jamais de 0.

    Astro

  6. #5
    kamor

    Re : DO 260/280 et 260/230

    Le spectre d'absorption fait une jolie courbe de Gauss. En fait comme le dit astrobax, le maximum d'absorption est à 260 nm, mais ça veut pas dire qu'il n'y a aucune absorption à 265 ou 280 (ou 240nm). C'est exactement pour ça que le rapport est de 2 en théorie.
    C'est pour cette même raison qu'on mesure à 280 d'ailleurs : parce que le pic d'absorption des protéines est à 280, mais qu'elles absorbent aussi à 260

  7. A voir en vidéo sur Futura
  8. #6
    aline555

    Re : DO 260/280 et 260/230

    vous avez deja eu toute les reponses,
    mais si vous voulais plus de details sur l'analyse de la qualité des ARN par nanodrop , je vous renvois sur le site
    http://www.biomedicalgenomics.org/RN...y_control.html,
    c'est le meilleur que j'ai pu trouvé après de longue recherche

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