Niveau thèse: choisir ses Ac pour marquage 4 couleurs au confocal

[invite4ee1220f]

Bonjour,

je suis en thèse d'immuno et en train de mettre au point un marquage 4 couleurs sur coupes congelées murines pour observation au confocal. Je maitrise la technique du marquage... J'aurais besoin d'un coup de main pour savoir comment choisir mes fluorochromes et mes anticorps, mais pas en terme de spectres d'excitation et d'émission.
Dans mon précédent labo on utilisait des marquages indirects avec des Ac spécifiques pour les marquage sur coupes. Ici, on ne fait que des marquages directs avec les mêmes Ac qu'on utilise pour le FACS mais je ne suis pas entièrement satisfaite du résultat (bruit de fond, intensité et durée du marquage...). Quelqu'un pourrait-il me dire dans quel sens aller pour commander mes prochains Ac? Plutôt marquage direct, parce qu'avec 4 couleurs des marquages indirects vont pas être faciles, ou plutôt marquages indirects, mais ce cas, comment bien choisir mes Ac secondaires... et choisir mes bons contrôles pour éviter les faux positifs.

Merci par avance.
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[piwi]

4 couleurs en marquage indirect ca va vraiment être chiant (je me demande même si c'est possible). Vous n'avez pas vraiment le choix, c'est marquage direct avec les problèmes que vous avez cités.
Pour le reste il n'y a pas vraiment de solution miracle. C'est mise au point, mise au point, mise au point. A commencer par chacun des anticorps séparément pour optimiser les conditions.

Bon courage.