Marquage GFP et autres couleurs

[invite721ab01a]

Bonsoir,

je me pose une question. on peut utiliser 2 marqueur différents pour savoir si des proteines se trouvent Moins de 10 nm l'une de l'autre.
mais faut t'il que si on a un marqueur qui reagit a 370 et emet a 470 le second marqueur qui se trouve a moin de 10 nm doit t'il reagir a une longueur d'onde inférieur a 470.

ce qui nou donnerai marqueur 1 qui reagit a 370 et emet a 470, marqueur 2 réagit a 460 et emet a 600 .
si elle se trouve a moin de 10 nm si envoie une longeur d'onde a 370 on recoit 600nm ce qui pouverai que les 2 sont a moin de 10 nm....
ou bien il n'est pas obligatoir que le 2nd marqueur réagit a une longeur d'onde qui serai comprise dans l'emision du 1er marqueur?

Merci
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[Jean-Luc P]

Bonjour cette technique s'appelle le FRET Fluorescence Resonance Energy Transfert. On utilise effectivement des fluorophores dont les spectres d'émission pour l'un et d'excitation pour l'autre se recouvrent.
Mais attention cette technique repose sur un transfert d'énergie par résonnace des orbitale moléculaire des molécules et pas par fluorescence du donneur.

La mesure peut se faire effectivement en excitant le donneur en regardant la fluorescence de l'accepteur, mais d'autres méthodes sont plus précises, comme le photoblanchiment de l'accepteur (méthode destructive) ou la mesure des durées de l'état excité du donneur (FLIM fluorescence lifetime imaging).

Un article Wikipedia à compléter : http://fr.wikipedia.org/wiki/Transfe..._fluorescentes