Salut !
Est-ce que quelqu'un connait précisément la quantité d'O2 nécessaire pour que la GFP fluoresce ?
Cette question m'est venue de la lecture d'articles sur l'expression de gènes au sein de biofilms bactériens, où la concentration en oxygène est très limitée.
Cordialement,
T.
c'est L'O2 qui est directement necessaire? Ou c'est plutot l'ATP cofacteur de la GFP synthétisé grace a l'O2 qui est important?
Yoyo
L'O2 moléculaire permet la mise en place finale du fluorophore, sans enzymes ni cofacteurs. Si on regarde la maturation de la GFP en milieu anaérobie, la protéine a le même comportement sur gel que la GFP normale mais ne fluoresce pas. Après maturation, l'oxygène n'a plus aucun rôle.
J'ai trouvé la réponse à ma question dans quelques articles : certains ont observé qu'à 1% d'oxygène atmosphérique, la GFP continuait à fluorescer. D'autres ont carrément montré qu'à 0,025 ppm, la GFP ne fonctionnait plus. La concentration en oxygène dans les biofilms pouvant être divisée jusqu'à 30 fois, au centre la GFP ne doit pas fonctionner.
En fait, étrangement, assez peu de travaux ont été menés précisément sur ce sujet: par exemple, on ignore (d'après ce que j'ai lu) si une pression partielle en oxygène plus grande que la pression atmosphérique accélèrerait la maturation. En revanche, on sait que la protéine met 2h à devenir fonctionnelle (des mutants abaissent ce temps à 30 minutes) et que des composés réducteurs peuvent "décolorer" la GFP en réhydrogénant le chromophore.
