Laci-gfp

[invitec5628bbe]

Salut j'ai un article a présenter , il y a une technique qui m'echappe .
Ils utisent un gene rapporteur LacO qui peut etre visualisé grace a LacI-GFP.Cette technique permet de visualiser la cohesion des chromatides.
Ce que je n'arrive pas a comprendre c'est s'ils utilisent 2 plasmides:un contenant lacO +gene d'interet et l'autre contenant lacI-GFP?
si quelqun a une idée sur la question merci d'avance
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[Yoyo]

salut

désolé mais avec ce que tu nous dit ca va etre difficile de te repondre, tu aurais la reference de l'article?

Yoyo

[gorben]

Salut,

A mon avis une partie de l'article a du t'echapper. LacO est l'operateur de l'operon lactose, c'est une sequence d'ADN reconnue specifiquement par LacI. Si LacI est fusionne avec GFP ca doit etre qu'ils veulent voir la fixation de lacI sur lacO. J'imagine que dans ce cas lacO doit etre a proximite d'une region qui doit se dupliquer, ou se condenser etc... A mon avis par cette methode ils veulent montrer par exemple que dans certains cas, les chromatides sont separees et donc tu as plusieurs lacO (visualisee par l'interraction avec lacI-GFP : plusieurs spot en microscopie) ou dans certains cas tout est ensemble.
Maintenant ce n'est qu'une suposition, comme l'a dit Yoyo il manque des infos !

Si ils utilisent plusieurs plasmides, j'imagine que c'est par simplicite. Soit ils avaient deja un plasmide contenant l'une ou l'autre des constructions, soit ils prevoient de faire plusieurs manip du genre, et donc de reutiliser l'un ou l'autre des plasmides !

A+

PS : ca m'interesserait d'avoir la ref de cet article...

[invitec5628bbe]

salut merci de m'avoir répondu je suis d'accord avec ce que tu m'as ecrit (gorden) , je trouve ca logique ! Il faudrait donc faire une construction contenant l'operon lactose et lacI-GFP ? Cette construction doit etre inserer pres du gene codant pour la cohésine ?
Mon article a ete publié dans science le 13/07/2007
DNA Double Strand Breaks Trigger Genome Wide Sister Chromatid Cohesion Through Eco1 (Ctf7)

Si vous voulez lire l'article :
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En tous cas je suis agréable surprise par la rapidité de vos réponse et l'interet que vous y portez. (Ca fait plusieurs jours que j'essaie de contacter un de mes profs , la moitié ne pépond pas et l'autre nous envoye gentiment balader)! Je vous en remercie encore !

[A voir en vidéo sur Futura]