[Biologie Moléculaire] Mlpa
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Mlpa



  1. #1
    invitebd1c6e2a

    Mlpa


    ------

    Bonjour,

    Comme toujours quand je me pose des question, je viens sur THE FORUM!

    La première: peut on m'expliquer le principe de la MLPA et la facon dont on procéde? Je sais que l'on peut voir des deletions ou duplications d'exons mais pas de mutations ponctuelles mais je ne sais pas trop quelle est la méthode...

    Deuxième: A propos du KO ou knocking Out, est ce que le gene neo que l'on utilise sert a creer un petit bazar dans l'exon oùnil est recombiné=>decallage de lecture...? Ou alors est il seulement utilisé comme gene de selection en plus de TK?
    dans le KO on ne peut donc pas vraiment choisir quand on va invalider un gene, à partir du moment il y a décallage du cadre de lecture?


    Jamais 2 sans 3: D'apres ce que jai compris (et encore je n'en suis pas sure) quand on fait une methode Inductive avec CRE et Lox P on invalide le gene en le supprimant par deux sites Lox P. Ainsi NEO ne serait ici uniquement un gene de selection?


    Comme vous pouvez le constater ces notions sont très vagues, c'est donc pour cela que je fais appel à vos connaissances!
    Si vous preferez me donner l'adresse d'un site internet qui parle des differentes methodes ca m'irait aussi.

    MERCI pour les réponses qui sont toujours de grande qualités!

    -----

  2. #2
    invite02e16773

    Re : Mlpa

    Bonjour,

    Effectivement, si deux sites lox P flanquent le gène A, lorsque la cre recombinase s'exprimera, la recombinaison site spécifique provoquera l'excision du gène A.
    Ainsi neo (neomycine ?) est utilisé comme gène de sélection lorsque l'on transfecte les cellules en culture.

  3. #3
    Flyingbike
    Modérateur*

    Re : Mlpa

    la cassette néo est aussi effectivement utilisée pour "mettre le bazar dans un gène" lorsqu'on veut réaliser un KO. Exemple : on insère la cassette en plein milieu d'un exon.

  4. #4
    Edelweiss68


  5. A voir en vidéo sur Futura
  6. #5
    invitebd1c6e2a

    Re : Mlpa

    MERCI encore une fois tout est rentré dans l'ordre grâce à ce forum!

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