Rendement Ficoll

[Moumoutte]

Bonjour à tous,

je viens de réaliser un ficoll et je me pose une question sur le rendement de ce type de manip. C'est la première que je la réalise et je n'ai donc aucun recul.
Pour faire vite, au sortir du ficoll j'ai une concentration en cellules de 1 millions/mL.
Si je regarde sur une numération sanguine le nombre de leucocyte doit tourner autour de 4 à 10 millions de cellules/mL.
Je trouve donc le rendement un peu faible. Qu'en pensez-vous? Tombez-vous aussi sur ce type de résultat lors de vos ficoll? Le rendement d'un ficoll est-il généralement faible?

Merci par avance
-----

[Kurisu]

Bonjour,

Il faut savoir que la numération des leucocytes englobe les granulocytes qui sont justement séparés des PBMC (= Lymphocytes + Monocytes) qui forment ton anneau (les granuleux se retrouvent dans le culot avec les érythrocytes). Hors les granuleux sont les leucocytes majoritaires (2,5 à 7G/L alors que les lymphocytes sont de 1 à 4 G/L et les monocytes de 0,5 à 1 G/L)

De plus on ne peut estimer le rendement puisque tu ne précises pas le volume dans lequel tu as repris tes PBMC ni combien de sang tu utilisais au départ...

[Moumoutte]

Merci pour ta réponse.

Effectivement les granulocytes ne sont pas pris en compte, ce que j'ignorais lors de mon calcul.
Je suis parti de 40 mL de sang total et j'ai repris les PBMC dans 40 mL aussi. Au final j'ai une concentration de 1 million de cellules par mL soit 40 millions de PBMC pour 40 ml de sang total. Je trouve que ça fait tout de même peu.

+

[fabien.che]

Tu visualises un bel anneau après ta centrifugation ? La séparation est nette ?

Je réalise des ficoll à partir de sang de cordon et je sors pour le même volume que toi, entre 1 et 3.10⁸ PBMNC... Mais je ne sais pas si on peut vraiment comparer avec du sang adulte...

Après, ça dépend aussi peut-être du prélèvement, ou vois-tu ce rendement à chaque fois ?

[A voir en vidéo sur Futura]

[Moumoutte]

Bonjour,

oui la séparation me semble correcte et l'anneau est bien présent.
Je n'ai pour l'instant réaliser qu'une seule manip de ce type, je n'ai pas d'autre point de comparaison et je ne peux donc pas te dire si j'obtiens ce rendement à chaque fois.
Néanmoins, après avoir demandé à droite et à gauche, je m'aperçois qu'en fait le nombre de cellules récupérées varie énormément.
Outre le fait, bien sur, que chaque prélèvement sanguin est différent, avec son propre nombre de PBMC, je pense que la technique de manip joue quand même beaucoup. Je vais donc essayé pour la prochaine fois de prélever encore plus de l'anneau. On verra bien.

Merci pour vos réponses

PS: il est effectivement possible qu'il y ait plus de blanc dans le sang de cordon que dans le sang adulte