Bonjour,
Je réalise des marquages pour microscopie confocale sur des cellules incluses dans des matrices de collagène ou attachées à la surface.
Le marquage nucléaire ne pose aucun problème (Yoyo).
Le marquage du cytoplasme par la phalloïdine-TRITC cependant, ne fonctionne pas.
Voici un petit résumé de tout ce qui a été fait pour comprendre l'origine du problème :
1) Premier marquage par une personne X : rien
2) Deuxième marquage par une personne Y avec deux solutions stock de phalloïdine distinctes : rien
3) Troisième marquage par la personne X sur les mêmes cellules mais dans un autre type de matrice (pas de collagène) : ça marche !!!
Parmi tout ça j'ai également augmenté le temps d'incubation du triton (de 10 à 30 minutes), mais comme le marquage nucléaire marche tout le temps, ce n'est pas un problème de perméabilisation des membranes.
J'ai augmenté le temps d'incubation de la phalloïdine, d'habitude une heure, je suis monté à 24 heures.
Pas de soucis avec les solutions stock non plus vu que ça marche dans un autre type de matrice...
Je pourrais augmenter la concentration de la phalloïdine mais je ne suis pas convaincu que cela change quelque chose. Donc avant de me relancer dans une dépense de matériel et de temps inutiles, quelqu'un a-t-il déjà rencontré ce genre de problème, ou aurait une idée à soumettre ?
Merci.
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