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Gamme étalon BSA



  1. #1
    Aoun88

    Gamme étalon BSA


    ------

    bonjour,

    J'ai une question à poser sur la gamme étalon BSA, et j'ai besoin d'une réponse urgente; quand l'absorbance mesurée pour un extrait protéique à tester est trop importante pour rentrer dans cette gamme c'est-à dire que la valeur est supérieure à la valeur max de la gamme, (ex : ma gamme se termine à une DO de 0.2OO et on cherche une quantité protéique pour une DO de 0.500), comment fait-on? Peut-on extrapoler en divisant la DO par 3 par exemple, on recherche la quantité protéique puis on remultiplie la valeur retrouvée par 3? Merci d'avance!

    -----

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  3. #2
    ptiteaurelie

    Re : gamme étalon BSA

    Bonjour,

    je te conseille de diluer ton échantillon protéique (dans le tp avec lequel tu fais ton 0/blanc) pour que ta Do de l'échantillon rentre dans ta gamme BSA. Après tu trouves la valeur/concentration de ton [B][B]échantillon dilué et tu fais ton calcul pour la concentration finale de ton échantillon en tenant compte de la dilution que tu as effectué.

  4. #3
    Aoun88

    Re : gamme étalon BSA

    A vrai dire, les manips sont terminées et donc j'ai tracé une gamme étalon à la main, avec en ordonnée une DO max de 0.2.... le problème c'est que j'ai des valeurs supérieures, pouvant aller jusqu'à 0.493. Est-ce que je peux diviser cette valeur par 3,ce qui donne donc une valeur de 0.164, je recherche la quantité protéique pour 0.164, puis je multiplie par trois le résultat trouvé?

  5. #4
    LXR

    Re : gamme étalon BSA

    La loi de Beer-Lambert est une équation de type y = ax+b où b = 0.

    En connaissant le coefficient directeur de ta droite, tu peux alors déduire théoriquement n'importe quelle concentration à partir de n'importe quelle absorbance. Mais en pratique, il vaut mieux avoir une gamme qui couvre l'ensemble des concentrations que tu as dans tes échantillons.

  6. #5
    Flyingbike

    Re : gamme étalon BSA

    surtout que en bradford par exemple, la linéarité se perd au dessus de 2µg/µL...

  7. A voir en vidéo sur Futura
  8. #6
    Aoun88

    Re : gamme étalon BSA

    ok merci beaucoup!

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  10. #7
    Edelweiss68

    Re : gamme étalon BSA

    Du moment que l'absorbance est comprise entre 0 et 1 et que les échantillons ne sont pas trop concentrés, la relation linéaire entre l'absorbance et la concentration est conservée.

  11. #8
    Flyingbike

    Re : gamme étalon BSA

    c'est vrai en dosage a 280, mais pas en dosage indirect !

  12. #9
    Edelweiss68

    Re : gamme étalon BSA

    Ah bon, pourquoi?

  13. #10
    Flyingbike

    Re : gamme étalon BSA

    c'est simple : quand tu fais un dosage indirect, tu fais une lecture d'A sur un produit qui est formé en présence de protéines (complexes), il peut donc y avoir une saturation du système en fonction de la technique. La quantité de protéine n'est peut être plus proportionnelle a l'absorbance

  14. #11
    Edelweiss68

    Re : gamme étalon BSA

    D'accord, merci.

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