Gamme étalon BSA

[invite00cb4433]

bonjour,

J'ai une question à poser sur la gamme étalon BSA, et j'ai besoin d'une réponse urgente; quand l'absorbance mesurée pour un extrait protéique à tester est trop importante pour rentrer dans cette gamme c'est-à dire que la valeur est supérieure à la valeur max de la gamme, (ex : ma gamme se termine à une DO de 0.2OO et on cherche une quantité protéique pour une DO de 0.500), comment fait-on? Peut-on extrapoler en divisant la DO par 3 par exemple, on recherche la quantité protéique puis on remultiplie la valeur retrouvée par 3? Merci d'avance!
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[invite98939c3f]

Bonjour,

je te conseille de diluer ton échantillon protéique (dans le tp avec lequel tu fais ton 0/blanc) pour que ta Do de l'échantillon rentre dans ta gamme BSA. Après tu trouves la valeur/concentration de ton [B][B]échantillon dilué et tu fais ton calcul pour la concentration finale de ton échantillon en tenant compte de la dilution que tu as effectué.

[invite00cb4433]

A vrai dire, les manips sont terminées et donc j'ai tracé une gamme étalon à la main, avec en ordonnée une DO max de 0.2.... le problème c'est que j'ai des valeurs supérieures, pouvant aller jusqu'à 0.493. Est-ce que je peux diviser cette valeur par 3,ce qui donne donc une valeur de 0.164, je recherche la quantité protéique pour 0.164, puis je multiplie par trois le résultat trouvé?

[invite71f23525]

La loi de Beer-Lambert est une équation de type y = ax+b où b = 0.

En connaissant le coefficient directeur de ta droite, tu peux alors déduire théoriquement n'importe quelle concentration à partir de n'importe quelle absorbance. Mais en pratique, il vaut mieux avoir une gamme qui couvre l'ensemble des concentrations que tu as dans tes échantillons.

[A voir en vidéo sur Futura]

[Flyingbike]

surtout que en bradford par exemple, la linéarité se perd au dessus de 2µg/µL...

[invite00cb4433]

ok merci beaucoup!

[Edelweiss68]

Du moment que l'absorbance est comprise entre 0 et 1 et que les échantillons ne sont pas trop concentrés, la relation linéaire entre l'absorbance et la concentration est conservée.

[Flyingbike]

c'est vrai en dosage a 280, mais pas en dosage indirect !

[Edelweiss68]

Ah bon, pourquoi?

[Flyingbike]

c'est simple : quand tu fais un dosage indirect, tu fais une lecture d'A sur un produit qui est formé en présence de protéines (complexes), il peut donc y avoir une saturation du système en fonction de la technique. La quantité de protéine n'est peut être plus proportionnelle a l'absorbance

[Edelweiss68]

D'accord, merci.