exercice de chromatographie pour un peptide

[invite5a332eab]

j'aurai une autre question concernant les AA.
On a un peptide C qui est constitué: A, D, 2C, 3E, L, K

On a obtenu le chromatographe du peptide C: on voit qu'à 3, 25 on a 2 pics, l'un petit (correspondant à un seul AA, du fait de sa hauteur), un 2e pic (correspondant plutot à un TROIS AA), donc celui ci correspond au E!
Puis à 4.25, on a Trois pic, le premier est de la mm hzuteur que le premier pic observe à pH 3,25, donc UN SEUL AA. Il est précisé que le 2e pic correspond à C, et le 3e à un pic de mm hauteur que le premier pic (dc UN SEUL AA). Et à pH 9, on a un seul pic (correpondant à un seul AA).

Pour savoir à quel AA correspond à quel pic, on compare le PH au pHi, car ici on a un peptide....
PH=3.25: PHi(D) = 3.0 et PHi(E) = 3.20.Et sachant que les différents AA se détachent de la résine d'autant meiux queleur charge est négative (= plus les AA st chargés négativement, plus ils se détachent...)
Dc à 3,25, on a : 3.25 sup. à 3.0 donc négatif, donc D se détache!
3.25 sup. à 3.20 donc négatif, se détache!

PH=4,25: PHi(C)= 5.0, PHi(A) =6.0 et PHi(L)= 6.0, PHi(K)= 9.8. Le PH est tjrs inf. à ces PHi, donc ce la veut dire qu'aucun AA est chargé négativement. Tous sont chargés positivement. Donc, tjrs fixé à la colonne. Alors pk On a 3PICS??
Mm question pour le dernier pic à 9.0.


Merci d'avance!!!
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[invite5a332eab]

j'aurai vraiment besoin d'aide!!!!
Alors s'il vous plait!!!! je vous en supplie!!

[Dreiyan]

J'avoue que j'ai un peu de mal à comprendre ton post (ça aiderait si tu le formulais plus clairement)

mais déjà : c'est quoi comme type de chromatographie?

[invite5a332eab]

En fait, on a une protéine P qui aprés hydrolyse trypsique, on obtient 4 peptides par la méthode de finger print (électrophorese à PH6,5 suivie d'une chromatographie). Aprés révélation on obtient 4 taches.
On prend un autre lot de P qui est aussi traite par la trypsine. Les 4 mm peptides st séparés par chromatographie sur gel d'exclusion. Puis ceux ci st soumis à une hydrolyse totale. Chaque hydrolisat est analysée sur une résine de polystyréne sulfoné échangeuse de cations (pH CROISSANT), ainsi on obtient quatre peptides a, b, c et d. Puis à titre d'exemple, on obtient le chromatogramme pour le peptide c ( sachant que le peptide c contient : A, D, 2C, 3E, L et K.). On peut voir sur le chromatogramme ( concentration en AA en ordonnée et volume effluent en abscisse): On voit qu'à PH=3.25, il y a deux pics, le premier correspond à un pic faible (dc par observation, jen ai déduis que ce pic correspond à un AA en nombre de 1(concentration). Puis il ya un 2e pic qui correspond à un nbre 3 AA (concentration). APH = 4.25, on voit 3 pics, l'un correpondant à un nbre de 1 AA (concen.), on sait que le 2e pic correspond à Cyst et le 3e à un nbre de 1 AA (conc.).A PH = 9, on a un seul pic qui correpond à un seul AA.

Dans la consigne, ils demandent en fait de situer les AA ds le chromatogramme.
Jespére que je suis claire cette fois ci ! Hesitez pas a me corriger... merci.
j'attends votre réponse

[A voir en vidéo sur Futura]

[vpharmaco]

Je suppose qu'il s'agit de chomatographie ionique avec une résine chargé negativement.
Je n'en ai jamais réalisé mais je suppose que l'idée et la suivante:
On part avec un tampon acide (pH=1-2). On a alors tous les aa chargés +. Ils sont donc liés à la phase stationnaire. A mesure que l'on augmente le pH, les aa vont se deprotonner. Lorsque l'aa sera neutre electriquement, il n'interagira plus avec la résine et sera élué.

C'est a confirmer mais au moins cela colle avec les resultats experimentaux;

[invite5a332eab]

j'ai oublié egalement de vs préciser une partie de la consigne: "sachant que les differents AA se détachent se la résine d'autant mieux que leur charge négative augmente...
Donc, cela voudrait dire qu'ils se détachent qd ils st négatifs???
Mais sa coincide pas avec ce que j'avais trouvé....