Conservation cellules fixées

[Fainaew]

Bonjour à tous,

je poste ma question ici car j'ai cherché un peu sur le net mais n'ai pas trouvé de réponse.
Je souhaite mesurer le taux d'apoptose de mes cellules avec l'AB M30 Cytodeath de chez Roche et je me demandais combien de temps il était possible de conserver les cellules :
- fixées dans le méthanol
- après incubation avec l'anticorps et lavage, et avant la mesure en FACS
sans que cela n'altère les résultats de la mesure.
Ne pouvant utiliser le FACS qu'à partir de lundi, j'ai le choix entre :
- réaliser mes transfections etc... la semaine prochaine et faire la mesure en milieu/fin de semaine
- réaliser mes transfections ce week-end pour effectuer la mesure lundi
- réaliser les transfections cette semaine et garder mes cellules fixées durant tout le week-end.

Que me conseillez-vous ?

Merci d'avance pour votre réponse
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[invite30157012]

Bonjour, Je ne sais pas quel est ton protocole de fixation mais moi je garde mes cellules fixées dans 70% EtOH dans PBS jusqu'à plusieurs jours à 4°C.

[Fainaew]

D'habitude ici on suit les instructions fournies avec le produit, c'est à dire que les cellules sont fixées dans du méthanol pur et conservées à -20 °C pour 30 min ou pour la nuit, suivant les disponibilités du FACS, mais personne n'a encore essayé de les garder plus longtemps