Ihc

[invite57cecb71]

Bonjour,

quel est l'intérêt d'utiliser un anticorps primaire puis un anticorps secondaire pour marquer une molécule? Ce n'est pas mieux d'utiliser un seul anticorps?
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[invite57cecb71]

De plus, je ne comprends pas la notion de témoin négatif. On prend des anticorps primaires de même type (isotype) que ceux utilisés dans l'expérience mais non spécifique à l'antigène considéré. Mais si ces anticorps sont isotypes, ça veut dire qu'il vont fixer le même antigène non? Donc, je ne vois pas très bien la notion de témoin négatif obligatoire en IHC.

[inviteae6c05c4]

Bonjour,

Si, c'est toujours mieux d'avoir recours à un anticorps primaire directement couplé, la spécificité sera toujours meilleure et ça permet de gagner du temps et des réactifs. Mais, ce n'est pas toujours possible, tout simplement parce que tous les anticorps n'existent pas directement couplés. Cependant, l'utilisation d'anticorps secondaires permet aussi de jouer avec les différentes couleurs disponibles, en fonction des filtres dont tu disposes ou des co-marquages que tu veux réaliser.

Concernant ta deuxième question, peut-être trouveras tu des réponses ici : http://forums.futura-sciences.com/bi...ytometrie.html

[Edelweiss68]

Bonjour,

Mais si ces anticorps sont isotypes, ça veut dire qu'il vont fixer le même antigène non? Donc, je ne vois pas très bien la notion de témoin négatif obligatoire en IHC.

Non car l'isotype est défini par les fragments constants des chaînes lourdes et légères alors que le paratope permettant la reconnaissance spécifique de l'Ag est constitué des fragments variables des chaînes lourdes et légères. Ainsi, deux Ac ayant le même isotype ne reconnaissent pas forcément le même Ag.

[A voir en vidéo sur Futura]

[invite57cecb71]

Ok merci pour votre aide