Microscopie électronique

[naniot]

Bonjour,

Je suis en train d'étudier les différents microscopes (optiques, à fluorescence, électroniques, ...). Mon problème est le suivant: je lis dans les notes d'un ami que la préparation d'une cellule à observer au microscope électronique (à balayage, je ne sais pas si il est important de le préciser) consiste à recouvrir l'échantillon d'atomes de métaux lourds (jusqu'ici, tout va bien). Mais il note que pour pouvoir recouvrir l'échantillon d'atomes de métal lourd, il faut assécher la cellule sans passer par l'état liquide (pour éviter la tension superficielle élevée de l'eau). Autrement dit, il faudrait que l'eau passe de l'état solide à l'état gazeux directement.

Mes questions sont donc multiples: l'eau des cellules est-elle présente à l'état solide? Si ce n'est pas le cas, doit-on congeler l'échantillon puis faire en sorte que l'eau passe directement à l'état gazeux? Mais le fait de congeler un échantillon est ce qu'on appele la cryofacture ou le cryodécapage, n'est ce pas? Sinon, quelles sont les différences entre ces concepts?

J'avoue que je suis un peu perdu. Merci de bien vouloir me remettre sur le bon chemin.
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[naniot]

Je pense avoir trouvé la réponse à mon problème:
http://fr.wikipedia.org/wiki/Microsc...3.A9chantillon

[noir_ecaille]

Si j'ai bonne souvenance, on peu substituer l'eau par de l'alcool qu'on va ensuite sublimer ?

[naniot]

Salut,
j'ai lu à plusieurs reprises qu'il était possible de substituer l'eau par de l'alcool que l'on va sublimer. Il faudrait que je retombe sur mes sources, je vais chercher car je ne sais plus quel alcool est utilisé. Mais, dans les notes de cours d'un ami, la méthode qui est décrite est la congélation de l'échantillon puis sa sublimation directe.
Quelqu'un connait les deux méthodes? Et laquelle des deux est la plus utilisée?
Merci

[A voir en vidéo sur Futura]

[invite1d40a42e]

Bonjour naniot ,

Alors je suis étudiant en Médecine , et nous avons vu la même chose que toi , sauf que pour me MEB nous sommes restés dans une descriptions un peu simpliste : objet métalisé , puis seulement le fonctionnement du microscope ..

Mais je peux te précisé que :

LA CRYOFRACTURE

Permet d'observer la partie interne du feuillet externe de ta bicouche phospholipidique ainsi que la partie externe du feuillet interne .

Possibilité d'observer ces differents feuillets :

- On congèle instantanément la membrane dans de l'azote ( -196° ) .

- On applique un trait de cassure à l'endroit le plus fragilisé de la membrane , c'est à dire entre les deux feuillets !!

NB : ATTENTION , les protéines transmembranaires ne serons pas coupées , elle vont se décollées avec la membrane interne ou externe aléatoirement . ( Ou elles irons sur la membrane interne , ou sur la membrane externe ) .

CRYODECAPAGE

Après avoir appliqué notre trait de cassure entre les deux feuillets nous pouvons observer le feuillet interne de la membrane externe et le feuillet externe de la membrane interne .

Pour pouvoir observer le feuillet externe de la membrane externe ( ATTENTION à ne pas se trompé de face de feuillets etc .. c'est assez complexe si on n'arrive pas à ce décrire la manipulation ou le schéma de cours .. )

Donc pour observer le feuillet externe de la membrane externe , nous allons faire du cryodécapage qui consiste à sublimé l'eau du cytoplasme ( car le cytoplasme est un milieu "aqueux" ) . En sublimant l'eau , le volume cytoplasmique vas diminué et vas donc laissé place au feuillet externe de la membrane externe qui était immergé dans le cytoplasme ( c'est pour cela que l'on n'a pu l'observer avec une simple cryofracture ! )

En éspérant avoir été assez clair !^^

Si tu as des questions

[invite1d40a42e]

Voici une image de cryofracture :

http://www.sante.univ-nantes.fr/med/...rane/zoom5.jpg

Désolé double post

[naniot]

Salut Mabarbe,
Merci pour ton post qui m'éclaire beaucoup. En fait, le cryodécapage n'est qu'une technique de la cryofracture qui permet d'observer le feuillet externe de la membrane externe. Et si on doit faire une sublimation, c'est parce que le cytosol contenu dans le cytoplame n'est pas entièrement aqueux... C'est bien ça?
c'est de moins en moins flou... Merci

[invite1d40a42e]

Presque Presque

Non , pour la sublimation on vas te faire apprendre que le cytoplasme ( cytosol ) est considéré comme "aqueux" , et on vas tout simplement sublimer l'eau du cytoplasme pour pouvoir observer le feuillet externe de la membrane externe , car sans cryodécapage , ce feuillet externe serai immergé sous les eaux ^^

enfaite c'est très dur de comprendre sans avoir un schéma sous les yeux , à chaque fois que j'explique ou que je révise je pense que j'ai faux , mais avec le schéma on observe que l'on a enfaite raison ^^

Donc pas de panique !

Et puis comme tu l'a dit : Cryofracture ==> Cryodécapage .

Crydécapage seul ne servirai à rien sans cryofracture avant

Bonne continuation !

[naniot]

Merci beaucoup pour tes informations. Bonne continuation pour tes études...