Electrophorèse-ADN

[invite03930724]

Bonjour,

J'ai quelques questions par rapport à mon TP. J'ai évidemment effectué quelques recherches avant, mais tout se mélange.

Il s'agit d'un compte rendu de TP portant sur l'analyse du polymorphisme de longueur d'un intron, et de fragments de restriction.

Pour cela on a effectué une électrophorèse sur gel d'agarose. On nous demande "tout simplement":
- Quelle autre technique aurait pu être utilisée ?
- Que peut contenir le bleu de dépôt pour que la migration ne se fasse qu'en fonction de la taille du fragment ?


Merci d'avance !
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[Edelweiss68]

- Que peut contenir le bleu de dépôt pour que la migration ne se fasse qu'en fonction de la taille du fragment ?

Pour cela il vous aurait fallu neutraliser la charge de l'ADN. Connaissez-vous un produit vous permettant de faire cela ?

[invite03930724]

Pour les protéines, nous avons vu que l'on pouvait utiliser du SDS. Mais peut-on aussi l'utiliser pour l'ADN ?

[invite03930724]

Pas de réponse ??

Je me doute que pour certains les réponses paraissent évidentes, alors merci de m'aider...

[A voir en vidéo sur Futura]

[Edelweiss68]

Pour les protéines, nous avons vu que l'on pouvait utiliser du SDS. Mais peut-on aussi l'utiliser pour l'ADN ?

Non le SDS n'est pas utilisé pour l'ADN qui est déjà chargé négativement. On peut jouer sur la dilution du gel d'agarose pour séparer plus ou moins bien les différents fragments d'ADN qui seront séparés selon leur taille.
Sinon en plus du bleu de dépôt, il y a du glycérol dans votre solution afin de faire tomber l'ADN au fond de chaque puits et pour qu'il puisse migrer grâce au tampon de migration moins dense.

[piwi]

En fait, la réponse est: rien. Classiquement le tampon de charge pour les acides nucléiques ne contient rien d'autre que des indicateurs colorés et du glycérol.
L'ADN linéaire migre en fonction de la taille du fragment sans autre ajout. Pour être plus précis, la charge du fragment augmente avec la taille. Les fragments les plus gros devraient donc avoir une migration facilitée. cependant, la résolution du gel freine plus les gros fragments que les petits. Ainsi, la séparation est largement plus contrôlée par la densité du gel que par la charge des fragments.

Sinon, pour la première question, on peut faire migrer l'ADN en gel acrylamide.

Cordialement,
piwi

[invite03930724]

Merci !
C'était donc en quelque sorte une question piège. Je me suis creusée la tête pour rien...

[Edelweiss68]

Je me suis creusée la tête pour rien...

C'est jamais pour rien !