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Marquage de l'ADN in vivo



  1. #1
    kinette

    Marquage de l'ADN in vivo

    Bonjour à tous,
    Je serais intéressée par réaliser un marquage in vivo de spermatozoïdes de petites bestioles.
    Si mes souvenirs sont bons, on peut marquer in vivo l'ADN grace à des bases modifiées... peut-être existe-t-il aussi des systèmes pour marquer les hitones, ou d'autres composants des spermatozoïdes...

    Si parmi vous certains connaissent un peu une ou plusieurs méthodes utilisables dans ce but, je serais vraiment intéressée d'en discuter!

    Merci d'avance!
    K.

    -----

    Nomina si nescis, perit et cognito rerum.

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  3. #2
    Vinc

    Re : Marquage de l'ADN in vivo

    Salut!
    Tu peux également marquer le cytosquelette! Sinon oui tu peux utiliser le DAPI qui va marquer ton ADN...
    Ou alors si vraiment tu veux te prendre la tête, tu transfectes un spermatozoïde par microinjection, avec un système rapporteur à la GFP amuses toi bien!

    A+
    Vinc
    Primum non nocere.

  4. #3
    kinette

    Re : Marquage de l'ADN in vivo

    Bonjour,
    Pour l'instant je suis plutôt en train de me renseigner sur le marquage BrdU, mais je ne sais pas si c'est d'usage facile, et si ça marche bien avec les spermatozoïdes (si l'ADN n'est pas ensuite trop compacté pour que les AC y arrivent).
    Il y a aussi la possibilité de marquage à la thymidine tritiée, mais ça impose de bosser avec de la radioactivité, ce que je préfèrerai éviter.

    Je m'intéresse à cette méthode pour différents types de manips: déterminer l'importance de la spermatogénèse (technique permettant de doser l'importance des divisions cellulaires), et aussi pouvoir différencier les spermatozoïdes de deux individus (un marqué, l'autre non)...

    K.
    Nomina si nescis, perit et cognito rerum.

  5. #4
    piwi

    Re : Marquage de l'ADN in vivo

    j'allais te conseiller la BrDU. A mon avis c'est le mieux pour ce que tu veux faire.
    Au labo on a une thematique spermatogenese et la personne qui s'en occupe s'en sert pour quantifier les divisions et l'etat de ses spermatocytes. Je sais pas pour les spermatozoides mais dans la mesure où l'on voit les douzes stades de la spermatogenese je ne vois pas pourquoi ca ne fonctionenrait plus pour les spermatozoides.
    Pour l'utilisation on ne peut pas plus simple. Une injection et terminé, ca s'incruste tres rapidement dans tous les tissus ^_^

  6. #5
    kinette

    Re : Marquage de l'ADN in vivo

    Hello Piwi!!!
    Merci pour ta réponse!
    Oui, d'après mes recherches la BrdU semble bien la meilleure solution.
    Est-ce que tu sais si la technique de révélation par AC est ensuite lourde?
    Si tu peux me donner le nom de la personne dont tu parles par MP, ça pourrait m'intéresser!!!

    K.ontente
    Nomina si nescis, perit et cognito rerum.

  7. A voir en vidéo sur Futura
  8. #6
    ciss_ou

    Re : Marquage de l'ADN in vivo

    Salut

    Pour avoir déjà réalisé des marquages au BrdU, je peux te dire que le marquage avec les anticorps ne pose généralement pas de problème. Tu peux soit utiliser un secondaire couplé à un fluorochrome, soit un secondaire couplé à la peroxydase que tu colores par réaction chimique.
    Personnellement je préfère la fluo (ça a beaucoup mieux marché avec mes manips). En plus, j'ai trouvé que la coloration avec la peroxydase donne des résultats hétérogènes. Bon, c'est valable pour mes manips, je ne sais pas pourquoi la coloration était dégueu, mais en tout cas la fluo a marché direct.

  9. Publicité
  10. #7
    kinette

    Re : Marquage de l'ADN in vivo

    Merci pour tes conseils!
    Reste plus qu'à convaincre les chefs de se lancer dans l'aventure...

    K.
    Nomina si nescis, perit et cognito rerum.

  11. #8
    piwi

    Re : Marquage de l'ADN in vivo

    oui c'est une manip' de routine basique à mettre en oeuvre, marquage facile, revelation facile, pas de variabilité d'efficacité selon les tissus. Le bonheur du petit biologiste ^_^

  12. #9
    piwi

    Re : Marquage de l'ADN in vivo

    peroxydase ou fluo?
    fluo sans hesiter.
    La peroxydase est une reaction enzymatique qui par essence à tendance à produire un signal diffu... Pas terrible quand on veut y regarder de pres. En fluo c'est tres joli en principe.

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