Molécule coloration ADN / électroporation / levure

[invitecdcabd22]

Bonjour,

Je cherche une molécule qui, lorsqu'elle arrive à pénétrer dans une cellule, produit une coloration (pas de fluorescence, quelque chose de visible ou de mesurable par simple photo ou spectrophotométrie).

But : mettre en valeur un phénomène d'électroporation (temporaire) chez la levure.

Il faudrait donc une molécule hydrophile (qui ne passe pas les membranes plasmiques) et qui si elle rentre dans la cellule permet de colorer celle-ci (par contact avec l'ADN par exemple)...

Des idées ?
-----

[invitecdcabd22]

Une alternative serait une molécule qui diminue énormément la croissance de la levure si elle pénètre dans celle-ci "mécaniquement", par électroporation par exemple...

Des pistes ?

[invite43a76894]

Bonjour,

Je vais peut être dire une absurdité, si ta levure est électroperforé, tu peux la transformer par un vecteur (plasmide ou autre) non conjugatif. Après tu peux lui coller un gène pour la synthèse d'une prot coloré X, et limite, un autre gène stoppant la croissance de ta levure si ça peux t'aider.

[invitecdcabd22]

Non, c'est pas absurde du tout mais un peu "compliqué" pour le but recherché. Il me semble en plus que le phénomène d'intégration d'un plasmide ne marche pas du tout à tous les coups.

Je pense que je pourrais regarder si ma technique d'électroporation augmenterai la sensibilité de mes levure à un antibiotique administré à faible dose par exemple... ca peut être un idée.

Mais une système de couleur serait génial car lisible par un lecteur de plaque 96 puits par exemple.

[A voir en vidéo sur Futura]

[invite43a76894]

Je continu dans mes idées farfelus:

Une protéine fusion avec un DNA biding domain, et un domaine actif enzymatique (de type Beta-Gal)... Une fois l'électroporation terminé, il suffit d'y ajouter le substrat (X-Gal ou ONPG) .. et paf une simple lecture au spectro. Seule difficulté mettre au point la protéine fusion. Mais je pense qu'une protéine de ce type doit déjà ce balader sur le commerce.

[Flyingbike]

Pour tester l'electroporation on utilise souvent des molécules de dextran fluorescent.