Cloner un site de Polyadénylation

[invite2d8da603]

Bonjour,

J'ai besoin d'aide svp
Il faut que je clone et caractérise un site de polyadénylation des ARNm.
Comment faut-il m'y prendre?

Merci beaucoup
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[invite71f23525]

Cela veut dire que la conservation de la partie 3' de ton ARNm est cruciale pour ton clonage. Donc pour être sûr de ne pas la perdre, tu peux te renseigner sur les techniques de 3'-RACE (Rapid Amplification of cDNA End). Reste à savoir si tu veux cloner l'ARNm entier ou juste une bonne partie contenant le site de polyadénylation? Il faudrait savoir aussi à partir de quel matériel tu vas partir, sur quoi vas-tu prélever l'ARNm d'intérêt (banque, cellules, bactéries surexprimant l'ARNm,....)?

[invite2d8da603]

Merci de votre réponse,
On part d'un eucaryote, une proteine codée par ce gène qui été purifiée. Cependant aucune séquence n'est connue.

[invite71f23525]

Même la séquence de la protéine n'est pas connue? Si elle est connue, tu peux utiliser des amorces dégénérées pour pouvoir amplifier la partie 5' de ton ADNc.

[A voir en vidéo sur Futura]