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Coloration Bradford.



  1. #1
    Ebly

    Coloration Bradford.

    Wikipedia :
    La méthode de Bradford est un dosage colorimétrique, basé sur le changement d'absorbance (la mesure se fait à 595 nm), se manifestant par le changement de la couleur du bleu de Coomassie après liaison (complexation) avec les acides aminées aromatiques (tryptophane, tyrosine et phénylalanine) et les résidus hydrophobes des acides aminés présents dans la ou les protéines.

    Le problème est le suivant :
    J'effectue une gamme étalon par la méthode de Bradford en dosant des masses connues d'albumine de boeuf. Le truc classique.

    Cependant, je suis censé me référer à cette gamme étalon pour déterminer la masse totale de protéine dans mes tubes. Sachant qu'il s'agit de mélanges d'une 20ene protéines différentes provenant de blanc d'oeuf... je me demande si j'ai "le droit" de déterminer des masses de protéines d'oeuf presentes en utilisant une gamme étalon d'albumine de boeuf.

    Je pense qu'au final, j'aurai une valeur approchée de la masse mais pas exacte car il s'agit de protéines differentes.

    Vous confirmez ?

    -----


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  3. #2
    Ebly

    Re : Coloration Bradford.

    Up

  4. #3
    LXR

    Re : Coloration Bradford.

    Je crois que tu as mal compris la question.

    Ce qui t'es demandé, c'est de déterminer la masse totale de protéines en général dans ton échantillon, pas de déterminer une masse molaire globale (je suppose que c'est ce que tu as compris).

    Donc tu détermines la concentration protéique de tes tubes. En connaissant le volume total d'échantillon, tu le multiplies par la concentration trouvée et tu tombes sur la masse totale de protéines présente dans chacun des tubes.

    Une question : ta courbe étalon est en fonction d'une masse connue d'albumine ou d'une concentration d'albumine? En effet, la démarche de calcul sera différente selon l'un ou l'autre cas.

  5. #4
    Ebly

    Re : Coloration Bradford.

    En fait c'est un TP.

    Mais je crois que je me prends un peu trop la tête. Pour moi, je peux pas déterminer la masse de Lysozyme ( par exemple ) avec une gamme étalon d'Albumine.
    Ce sont pas les mêmes protéines.

  6. #5
    noir_ecaille

    Re : Coloration Bradford.

    C'est donc un rapport massique et non molaire qui est probablement demandé.
    "Deviens ce que tu es", Friedrich W. Nietzsche

  7. A voir en vidéo sur Futura
  8. #6
    Ebly

    Re : Coloration Bradford.

    ouais. Bref je vous remercie en tout cas !

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