Bonjour,
Je suis à la recherche d'un protocole d'extraction des plaquettes sanguines.
Je suis sur PubMed depuis ce matin, mais je ne trouve rien de bien préçis sur les plaquettes uniquement ...
Cela doit être juste une question de centrifugation mais je ne trouve pas ...
Quelqu'un aurait une idée ?
Hello,
J'ai pas lu l'article, mais juste l'abstract, je sais pas si ça peut te suffire
Source: Isolation of Human Platelets, J. Graham, TheScientificWorldJOURNAL (2002)Abstract
Platelets from human blood can be isolated in high yield by centrifugation of whole blood over an iodixanol density barrier of 1.063 g/ml. The separation from all of the blood cells (which form a pellet) is based on the slower sedimentation velocity of the smaller platelets.
Ah j'avance un peu ! Merci !
Malheureusement, je n'ai ps accès à l'article entier :/
Il arrive assez souvent que des articles pas accessibles depuis PubMed, le soit sur Google Scholar... essaye aussi là-bas...
Enfin, en tout cas, c'est mon expérience.
Cordialement,
Astro
Double post, désolé...
Tu devrais surement avoir accès à celui-là par contre:
"Isolation of Human Blood Cells, Platelets, and Plasma Proteins by Centrifugal SPLITT Fractionation"
C. Bor Fuh,
J. Calvin Giddings
Biotechnology Progress (1995)
Merci pour vos réponses.
J'ai trouvé ce que je voulais ici :
http://www.axis-shield-density-gradi.../cells/C12.pdf
Bonjour,
Je travaille également sur les plaquettes, les ARN de plaquette plus précisemment.
En fonction de vos besoins, à partir de sang total, deux types de protocoles sont réalisables en fonction du degrés de pureté des préparation plaquetaires souhaités.
La 1ère méthode est la réalisation d'un PrP (plasma enrichit en plaquettes), par une simple étape de centri à 900 rpm (env. 200g) pendant 10 min. Il suffit ensuite de récupérer 70% du surnageant (pour éviter la contamination par les érythrocytes et les leukocytes). Ensuite une centri à 3000 rpm (env. 1600g) pendant 10min et vous obtenez un culot de plaquettes.
La deuxième méthode multiplie juste les étapes successives à 200g et 1600g afin d'éliminer les leukocytes résiduels (d'où le gain en pureté).
Pour donner un exemple, lors de la mesure de l'activation plaquetaire par mesure de flux de calcium, je me contente d'un PrP, évitant ainsi d'activer les plaquettes avec les étapes de centri successives. Cette méthode est plus que satisfesante car mes activateurs sont spécifiques des plaquettes, la contamination par des leukocytes n'est donc pas importante.
En revanche, pour la qPCR, la contamination par les blancs et très très génante vu la quantité d'ARN exprimé par une plaquette. D'où le besoin de purifier encore et encore.... En revanche l'activation n'a pas d'impact sur le niveau d'expression des ARN messagers.
Je travaille en tyrode buffer ou en BSCG (buffer saline glucose citrate).
En espérant vous avoir aidé....
Il me semble que ce soit le principe d'un Ficoll... Très utile pour obtenir des prep sans contaminants rouges, mais il reste tout de même des leukocytes.Envoyé par frigrin
Encore une fois, tout dépend des applications que vous en faite.
