Bonjour à tous
Voila j'ai un petit souci concernant le protocole loxP/Cre. J'aurais voulu savoir, comment les 2 sites loxP étaient incorporés aux souris ? je ne sais pas si c'est par l'intermédiaire des plasmides, si il fallait les incorporer aux blastocytes ...
D'autre part, si le système incorporation des sites loxP était le même pour celui du gène Cre ???
Merci d'avance pour vos réponses
si tu veux cibler un gène précis avec les séquences lox, il faut passer par de la recombinaison homologue (une recherche google devrait te dire comment ça marche) pour substituer ton gene sauvage avec une construction contenant les sites loxp.
Si tu veux faire de la surexpression inductible, donc avec un transgène c'est comme pour la CRE, on passe par de la transgénèse classique (google aussi).
Si tu veux des précisions, n'hésites pas !
Hello ,
En fait tu fais une construction plasmidique avec ton gène d’intérêt encadrée par tes deux séquences loxP (ainsi qu'un gène de sélection). Tu récupères les cellules ES et tu fais une electroporation afin d’insérer tes plasmides dans tes cellules( ou alors par infection retrovirale ). Tu peux alors sélectionner les cellules qui ont réalisé la recombinaison homologue ( échange de morceau d'adn au niveau de séquence homologue, phénomene observé lors du crossing over ) et les réinsérer dans un blastocyste. L'embryon est alors réinseré dans une femelle pseudo-gestante ( et tout et tout ^^ )
Pour la cre je ne sais pas s'il s'agit de transgénèse classique ou ciblée désolée...
En esperant t'avoir un peu aidé.
