Mutations et Southern Blot

[invite2fe88075]

Bonjour à tous,
dans le cadre de mes révisions pour les partiels, j'ai quelques questions auxquelles je n'arrive pas à répondre.

L'exercice est le suivant :
Nous avons un gène, hppy qui peut être affecté de trois mutations :
EP: insertion d'un élément transposable (8kb ne contenant pas de site EcoR1)
M : mutation ponctuelle (qui abouti à l'excision de l'exon 6)
Dhppy : délétion du gène

Question 1: on fait un southern : cette méthode est elle adaptée pour tous les types de mutation ? Quelle serai l'expérience la plus adaptée ?

Question 2 : quel est l'intérêt d'utiliser des anticorps dirigés contre la partie N tem de la protéine ?

Merci de votre aide !
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[jmbowie]

Bonjour à tous,
dans le cadre de mes révisions pour les partiels, j'ai quelques questions auxquelles je n'arrive pas à répondre.

L'exercice est le suivant :
Nous avons un gène, hppy qui peut être affecté de trois mutations :
EP: insertion d'un élément transposable (8kb ne contenant pas de site EcoR1)
M : mutation ponctuelle (qui abouti à l'excision de l'exon 6)
Dhppy : délétion du gène

Question 1: on fait un southern : cette méthode est elle adaptée pour tous les types de mutation ? Quelle serai l'expérience la plus adaptée ?

Question 2 : quel est l'intérêt d'utiliser des anticorps dirigés contre la partie N tem de la protéine ?

Merci de votre aide !

Question 1: Connais-tu la technique Southern ? Que faut-il pour qu'elle fonctionne ? que permet t'elle d'identifier ? Essaie de formuler ce qui te pose problème, c'est comme cela que l'on (= toi et nous) trouve les réponses

[invite2fe88075]

Le southern est effectué pour analyser une partie du génome et ses modifications éventuelles. Il est fait avec de l'ADN génomique que l'on a fait digérer par EcoR1, et on a hybridation avec une sonde radioactive synthétisée par l'ADNc et on compare les distances de migration avec des fragments de tailles connues qui servent de marqueurs de taille.

Je n'arrive justement pas à comprendre quelle mutation ne sera pas visible avec le southern (je risque de raconter de grosses bêtises, mais voilà ce que j'ai compris
-Pour EP, nous allons avoir une bande qui va migrer moins loin (car ajout de 8kb)
-Pour M,nous allons avoir une bande qui va migrer plus loin (car on enlève un exon)
-Pour Dhppy, nous n'aurons pas de bande, étant donné qu'on enlève le gène

[jmbowie]

Ton raisonnement est juste mais je me pose la question du positionnement de la sonde.
- l'EP me gène. Même s'il n'a pas de site EcoRI il peut perturber le site d'hybridation de ta sonde non ? Dans ce cas là tu auras un résultat négatif, qui se confond avec le résultat de la délétion du gène.
- C'est le même problème avec l'exon: si ta sonde est le produit de retrotranscription d'un gène avec exon et que ton gène l'a perdu, peut-on encore détecter un tel gène ?

[A voir en vidéo sur Futura]