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Southern blot

  1. #1
    XIII

    Southern blot

    Salut est ce que quelqu'un pourrait me dire a quoi servent les étapes de dénaturation , neutralisation et d' irradiation aux UV lors d'un Southern
    merci

    -----


  2. Publicité
  3. #2
    vero0oo

    Re : Southern blot

    dénaturation: pour supprimer les structures secondaires et donc n'avoir des simples brins qui pourrnt s'hybrider avec la sonde.
    pour le reste, je ne sais pas (qu'est-ce que tu entends par neutralisation?)

  4. #3
    Yoyo

    Re : Southern blot

    L'irradiation aux UV permet de photoponter les molécules d'ADN a la membrane de nitrocellulose. Ceci permet d'eviter de perdre les fragments d'ADN lors des hybirdations.

    YOyo

  5. #4
    nayeki

    Re : Southern blot

    La neutralisation sert à tamponner (après dénaturatio) étant donné que tu dois hybrider avec une sonde par la suite... Les UV servent à "ponter" l'ADN comme l'a dit YoYo, cependant cette étape est facultative, et certains sautent cette étapes... (pas moi en tout cas )
    Chacun pense ce qu'il veut... moi, je veux ce que je pense.

  6. #5
    XIII

    Re : Southern blot

    merci à tout le monde

  7. #6
    AlexIP

    Re : Southern blot

    j'ai calcule ma Tm, je trouve 75C pour l'hybridation. Le protocol du labo parle de 65C. Je pense que 70C c bon n'es ce pas?

    Es ce que le tampon de lavage ds des conditions de stringence doit etre augmente de 55C (sur le protocol du labo) a 65C. Sachant que pour l'instant je n'ai modifier que la force ionique du tampon de lavage est j'ai obtenu un coup un film blanc, un coup film noir.... Je me dis dc qu'il faut plus jouer avec la temperature...

    Mon tampon d'hybridation a une concentration de 0,5M, c'est ce que conseille amersham...
    Mon fragment a un tx de GC% de 32,3, et, ma sequence fait 897pdb.

    HELP ME PLZ!

  8. #7
    AlexIP

    Re : Southern blot

    j ai oublie de dire que ma Tm pour mon lavage est de 67C...

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