Salut est ce que quelqu'un pourrait me dire a quoi servent les étapes de dénaturation , neutralisation et d' irradiation aux UV lors d'un Southern
merci
-----
06/04/2005, 23h03
#2
invitef1b4a1e8
Date d'inscription
janvier 1970
Messages
156
Re : Southern blot
dénaturation: pour supprimer les structures secondaires et donc n'avoir des simples brins qui pourrnt s'hybrider avec la sonde.
pour le reste, je ne sais pas (qu'est-ce que tu entends par neutralisation?)
06/04/2005, 23h40
#3
invitec9f0f895
Date d'inscription
janvier 1970
Messages
15 582
Re : Southern blot
L'irradiation aux UV permet de photoponter les molécules d'ADN a la membrane de nitrocellulose. Ceci permet d'eviter de perdre les fragments d'ADN lors des hybirdations.
YOyo
07/04/2005, 15h44
#4
invite9e6bc039
Date d'inscription
janvier 1970
Messages
331
Re : Southern blot
La neutralisation sert à tamponner (après dénaturatio) étant donné que tu dois hybrider avec une sonde par la suite... Les UV servent à "ponter" l'ADN comme l'a dit YoYo, cependant cette étape est facultative, et certains sautent cette étapes... (pas moi en tout cas )
Aujourd'hui
A voir en vidéo sur Futura
07/04/2005, 18h35
#5
invite481f0dd7
Date d'inscription
janvier 1970
Messages
85
Re : Southern blot
merci à tout le monde
12/04/2006, 09h39
#6
invite986e7815
Date d'inscription
janvier 1970
Messages
5
Re : Southern blot
j'ai calcule ma Tm, je trouve 75C pour l'hybridation. Le protocol du labo parle de 65C. Je pense que 70C c bon n'es ce pas?
Es ce que le tampon de lavage ds des conditions de stringence doit etre augmente de 55C (sur le protocol du labo) a 65C. Sachant que pour l'instant je n'ai modifier que la force ionique du tampon de lavage est j'ai obtenu un coup un film blanc, un coup film noir.... Je me dis dc qu'il faut plus jouer avec la temperature...
Mon tampon d'hybridation a une concentration de 0,5M, c'est ce que conseille amersham...
Mon fragment a un tx de GC% de 32,3, et, ma sequence fait 897pdb.
HELP ME PLZ!
12/04/2006, 15h35
#7
invite986e7815
Date d'inscription
janvier 1970
Messages
5
Re : Southern blot
j ai oublie de dire que ma Tm pour mon lavage est de 67C...