Problème avec mes dosages d'ARN
Bonjour tout le monde!
J'ai un petit problème avec mon dosage d'ARN: le rapport de DO 260nm/280nm est supérieur à 2je vois pas trop ce que ça signifie et de quelle contamination il s'agit, d'autant plus que quand je recommence le dosage un autre jour, c'est encore pire
Si vous avez une idée, je suis preneuse! MerciBon aprem et à bientôt ^^
Sanvi, apprentie chercheuse (pas très douée pour l'instant lol
)
Peut etre un probleme avec le spectro. Je te recommande de faire un gel pour verifier les concentration obtenu par OD et surtout pour voir la qualite des ARN.
Salut
Attention au tampon dans lequel tu dilues tes ARNs pour ton passage au spectro.
Le rapport 260/280 doit etre fait avec un echantillon dilué dans du TE, le dosage 260 doit etre fait dans de l'eau... peut etre que ton probleme vient de la.
A+
j'ai eu le même problème il y a quelque temps, aprés renseignement pris auprés d'ARNiste, il semble que ça puisse être du à des contaminations autre qu'ADN, notamment protéique.
Le-Trool: si il y a une contamination par des protéines, ton rapport DO260/280 serait inférieur à 1. je te rappelle que les protéines (90%) absorbent à 280nm!
dans une solution de protéine pur les protéines absorbent entre 260 et 280 nm (phe pic à 260 nm, trp pic à 280 nm ) tout depend de la composition de ta prot en acide aminé
enfin bref moi ce que j'en dit c'est la reponse que m'en a fait un spécialiste : contamination notament (que j'aurais peut être du remplacer par entre autre) protéique. je pense qu'il voulais me dire surtout >3 ==> mixture infame.
mais je dois avouer m'être contenté de cette réponse à l'époque
coucou
généralement quand j'ai une DO aussi élevée j'essaie de diluer mes échantillons
Merci merci de toutes vos réponses, j'en prends note ^^
En fait, je passe une fois mon échantillon dilué dans de l'eau au spectro et ça me donne les DO à 260 et 280 ainsi que le rapport pour l'avoir dans les mêmes conditions que le dosage des ARN proprement dit.Envoyé par gorben
Une question idiote: c'est quoi le TE? ^^"
Merci ^ ^
Sanvi
Le TE c'est du Tris 10 mM + EDTA. Essaye de refaire ton rapport en ayant mesuré les DO dans du TE, ca change pas mal de chose. Par contre, ta concentration mesurée à 260 n'est juste que dans de l'eau.
A+
Je vais essayer ça, merci gorben
Juste une autre question: pourquoi utiliser ce tampon? Qu'est ce que ça fait concretement?
A bientot ^^
Le tris est souvent utilisé pH8 pour mieux redissoudre l'ADN aprés precipitation, l'EDTA est un chelateur, il permet d'inactiver un certain nombre d'enzymes qui pourrait encore se trouver dans ta prep.
Ok, merci beaucoup ^^
Bonne nuit
