Les empreintes génétiques !

[inviteda083fb1]

Bonjour !

J'ai un petit problème avec les empreintes génétiques ! je n'arrive pas bien à comprendre comme on "les obtient" !

Je sais qu'il faut extraire l'ADN des cellules, que le test s'effectue sur des parties non codantes de l'ADN mais hautement répétées (mini et micro satellites), qu'il faut ensuite procèder à une PCR (3étapes) pour multiplier les fragment d'ADN.

Mais après je m'embrouille un peu !
Surtout avec l'éléctrophorèse ! j'entend parler d'électrophorèse sur gel d'agrose etc etc...
j'entend également parler d'enzimes qui "copie l'ADN" et est ce que les sondes radioactives sont utilisées pour les empreintes génétiques ? ( comme les sondes utilisées pour les maladies génétiques)

Voilà ! pouvez m'éclairez ? car c'est assez flou pour moi en ce moment !

D'avance merci.
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[invite1d150e73]

Coucou, je suis pas super calé la dessus, mais je sais qu'il faut utiliser des enzymes de restrictions pour couper les séquences d'ADN spécifiques voulues, puis de chauffer pour séparer les 2 brins, avant de faire une électrophorèse sur gel d'agarose en oubliant pas d'ajouter un agent intercalant comme le BET. Pour le cas des sondes, elles sont ajoutées lors du transfert des empreintes sur la membrane(le papier). Mais je m'avance pas plus parce que je ne sais pas très bien si c'est quelque chose comme ça que tu cherches.

[invitee8b3f97e]

Salut !

Peut être faudrait il préciser un peu plus ce que tu sais déjà et ce que tu souhaite approfondir.

Je vais tenter une explication (en espérant ne pas trop dire de bétises).

1) On extrait l'ADN des cellules.

2) Par PCR on amplifie une région spécifique de l'ADN qui est très variable selon les individus car non codante.

3) On utilise une enzyme de restriction qui a la propriété de couper les brins d'ADN quand elle rencontre une séquence spécifique. Comme les régions ciblées sont variables selon les individus, la localisation des séquences "à couper" est différente d'un individu à l'autre. On obtient alors des fragments de taille différente.

4) Ces fragments sont séparés par migration sur gel d'agarose.

5) L'ADN est coloré pour permettre de le localiser sur le gel : il existe pour cela différentes techniques : BET, SyBR Green (agents intercalants), sondes radioactives...

On obtient alors une empreinte constituée d'une succession de fragments d'ADN de taille différente. Cette empreinte est en général spécifique d'un individu.

[inviteb753ced1]

Salut,

En complément de la réponse donnée, un petit document PDF.

A+

[A voir en vidéo sur Futura]

[inviteda083fb1]

Merci beaucoup à vous 3 de m'avoir répondu aussi rapidement !

Ananda, le lien que vous m'avait donné m'est très utile ! Enfin un document claire ou les étapes sont expliqué clairement c'est très rare !

Une question me vient encore à l'esprit :

1°) Dans le document est indiqué que " les cellules sont lyssées afin de liberer l'ADN de celles-ci"
Lyssées ? C'est à dire ? En quoi cela consiste ?



Merci encore !

[inviteb753ced1]

Il faut lire "lyser les cellules", c'est à dire détruire les cellules pour libérer le contenu cellulaire, dont l'ADN. En gros ça consiste à dissoudre/fragmenter les membranes, à enlever les protéines, etc., dans des conditions qui permettent cependant de garder intact l'ADN, qui est récupéré au final. On lyse aussi des bactéries, des levures

a+

[inviteda083fb1]

Ah d'acoord ! Merci beaucoup pour vos explications !