Bonjour
Je cherche à doser le NO circulant dans du plasma de souris. Nous avons déjà testé un kit mais il ne nous convient pas (problèmes de reproductibilité).
Est ce que quelqu'un ici aurait l'expérience des kit de dosage du NO (ou utiliserait une méthode maison)?
Merci d'avance pour votre aide!
je suis toujours étonné des gens qui dosent le NO (un peu comme ceux qui dosent le O2.-)
C'est très réactif, c'est un gaz, du coup la durée de vie est de quelques secondes. Donc : peut-on vraiment doser un truc pareil avec des techniques habituelles ?
Je suis tout à fait d'accord, l'idée serait plutôt des doser les métabolites stables du NO (NOx).
Il existe des kits mais comme on a eu une mauvaise expérience, je cherche des personnes qui ont du recul sur ce type de kit ou qui font ce type de dosage en routine
Bon alors pour contribuer, j'ai cherché dans les papiers d'un chercheur que j'ai eu en cours il y a quelques années et qui a beaucoup travaillé sur le NO. Il fait toujours référence a ce papier si ça peut t'aider :
Anal Biochem. 1993 Oct;214(1):11-6.
A fluorometric assay for the measurement of nitrite in biological samples.
Misko TP, Schilling RJ, Salvemini D, Moore WM, Currie MG.
Source
Department of Molecular Pharmacology, Monsanto Corporate Research, St. Louis, Missouri 63167.
Abstract
The increasing importance of nitric oxide synthase has been underscored by the elucidation of its role in a growing number of normal and pathophysiological processes. Therefore, techniques for detection of nitrite/nitrate, oxidation products of the enzymatic conversion of arginine to citrulline and nitric oxide, should serve as useful tools in defining the contribution of NO synthase to these processes. We have developed a rapid and sensitive fluorometric assay for quantification of nitrite/nitrate based upon the reaction of nitrite with 2,3-diaminonaphthalene to form the fluorescent product, 1-(H)-naphthotriazole. The assay can be used to detect 10 nM nitrite, making it 50-100 times more sensitive than the well-known Griess assay. Moreover, the assay is adaptable to a 96-well plate format, facilitating the handling of a large number of samples including conditioned media from cell culture or the nitrite generated by the purified enzyme. Nitrite/nitrate levels in blood can also be monitored using this assay when it is combined with a filtration step (to remove hemoglobin) followed by conversion of the nitrate to nitrite by nitrate reductase. Thus, this fluorometric method combines speed and sensitivity with the handling of a large number of samples for the quantification of nitrite generated from in vivo and in vitro sources.
PMID: 7504409 [PubMed - indexed for MEDLINE]
