méthode de Bradford

[petitelectron]

Bonjour,
J'ai une toute petite question sur le principe de cette méthode : Lorsqu'on veut par exemple quantifier les protéines d'une solution à l'aide d'une gamme de sérumalbumine bovine prédéfinie. Où met on le Bradford ?? est ce qu'il est sur toute la plaque de micotitration ou bien il doit être mélanger dans chaque puits avec le sérum albumine et notre solution à titrer .. Je ne vois pas quand est ce qu'il intervient ..
Et si j'ai bien compris la gamme de sérumalbumine bovine prédéfinie va réagir avec le Bradford qui aura une coloration de plus en plus intense plus la concentration sera élevée, en comparant avec notre solution à doser qui elle aussi à réagit avec le bradford et va donner une certaine coloration, on saura donner la concentration en proteine de la solution à doser en fonction de son intensité en bleu ? Ai-je bien compris ?
Merci
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[Aqualung]

Bonjour,

Oui tu as bien compris le concept de courbe étalon.

Le bradford est un réactif, il doit être ajouté dans chaque puits contenant une protéine à doser, que ce soit l'étalon (la BSA) ou la solution à concentration inconnue.

[petitelectron]

Merci !
Par contre je ne sais toujours quelle quantité de Bradford (ou bleu de coomassie) mettre dans mes puits rien n'est indiqué dans mon protocole à part de diluer le bradford au 1/5ème... Je suppose qu'on en met que quelques gouttes...