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Méthode de Bradford



  1. #1
    Glouglou14

    Question Méthode de Bradford

    Bonjour

    Le réactif de bradford se lie aux chaines latérales des acides aminés basiques (arg, lys...). Ceci entraine un déplacement de son absorbance de 465nm à 595nm. Cela permet de doser par spectrophotométrie des protéines.

    Quel est l'intérêt d'effectuer un tel dosage alors que pour doser des protéines il suffit de le faire a 280nm grâce à l'absorbance des aa aromatiques. Cela me parait plus simple mais j imagine que si on prend la peine d'utiliser bradford c est qu il propose certains avantages...?

    merci

    -----


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  3. #2
    Vinc

    Re : Méthode de Bradford

    Bonjour!
    Je n'ai pas de réponse précise mais je suppose qu'il a une relation avec l'abondance relative des différents acides aminés importants pour l'un ou l'autre type de dosage.

    V.
    Primum non nocere.

  4. #3
    Glouglou14

    Re : Méthode de Bradford

    Merci pour la réponse.

    ça serait donc peut être une question "d'amplification de l'absorbance" histoire de pouvoir détecter des quantités plus faible ?

  5. #4
    MaliciaR

    Re : Méthode de Bradford

    Salut,

    Si j'ai une protéine qui n'a pas ou très peu d'aa aromatiques, j'en fait quoi avec 280 nm? Pas grand-chose. Surtout que c'est le tryptophane qui absorbe essentiellement à cette longuer d'onde, la phénylalanine et la cystéine le font faiblement. La sensibilité n'est pas terrible non plus (si je me souviens bien, c'est de l'ordre du 50-100µg). Mais le problème majeur est dans les acides nucléiques : ils absorbent très fortement à 254 nm, donc un simple contaminant de ta protéine et tout est faussé... Il te faut donc un protéine pure, toute seule (parce que le mélange et l'absorbance à 280nm, ce n'est pas le top...), en quantité assez importante.

    En ce qui concerne le Bradford, le bleu de Coomassie est très sensible, il ne complexe pas seulement avec les chaînes latérales de la Lys et Arg, mais aussi avec l'Histidine. Et il te permet de détecter des quantités entre 5 et 10 µg , ce qui est déjà mieux. Et en plus le bleu de Coomassie ne craint pas les interférants, il détecte les 3 acides aminés, point.

    Cordialement,
    An expert is one who knows more and more about less and less.

  6. #5
    Glouglou14

    Re : Méthode de Bradford

    ok merci bien

  7. A voir en vidéo sur Futura
  8. #6
    micha2babez

    Re : Méthode de Bradford

    bonsoir,
    de mon coté je rencontre des difficultés pour tracer la droite,je sais que ça sera la DO en fonction de la concentration de BSA.mais le problème c'est qu'on a utilisé 5 tubes dont un est le blanc plsu deux autres de 1/10 et 1/100 de serum dilué (notre échantillon à doser est l'immun serum),dans ce cas la comment je tracerai ma droite?est-ce qu'elle passera par le zero ou non?et comment interpréter mes résultats?

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  10. #7
    micha2babez

    Re : Méthode de Bradford

    oups désolé!!!!!!! j'espere vraiment avoir une réponse et je vous remerci d'avance.byye

  11. #8
    Moumoutte

    Re : Méthode de Bradford

    Bonjour,

    et bien c'est simple. Normalement tu dois connaitre la concentration de tes 5 tubes qui contiennent de la BSA (concentration différente à chaque fois, qui double par exemple). A partir de là, tu as du les doser et tu connais donc maintenant leur DO.
    Tu n'as plus qu'à tracer tes cinq points dans le graphe qui représente la DO en fonction de la concentration et tracer la droite. Je dis bien: droite. Ne relie pas les points entre eux mais fais une régression linéaire (une droite "moyenne" si tu préfères)
    Ensuite tu reportes sur la courbe la DO que tu as obtenu pour tes deux échantillons (1/10eme et 1/100eme) et tu n'as plus qu'à lire la concentration de tes échantillons (en n'oubliant pas de rétablir le facteur de dilution). Pour être plus précis tu peux également calculer la concentration à partir de l'équation de la droite. A toi de voir.

    Cordialement

  12. #9
    micha2babez

    Smile Re : Méthode de Bradford

    merci beaucoup,je vous avoue que vous m'avez eclaircis tous le probleme et que ça m'a beaucoup aidé à résoudre mon travail.merci encore.agréable soirée.

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