test bradford et acides nucléiques

[invitead95ec9b]

bonsoir tout le monde,

j'ai une question concernant le test de bradford que j'ai du effectué lord d'un tp de biochimie

le principe est le suivant : on a 3 solutions dont une solution d'acides nucléiques que l'on soumet au réactif de bradford dont le but est la mise en evidence de protéines (en présence de protéines il vire au bleu)

ainsi, dans ma solution protéique on observe bien une coloration bleue. Cependant, on observe également une légère teinte bleue au niveau de ma solution d'acides nucléiques. Par conséquent j'aurai souhaité savoir quels protéines pourraient être associées à ces acides et dont présentes dans ma solution.

De plus, le test de bradford a été effectué sur 3 solutions ( une solution de glucide, de protéines et d'acides nucléiques que l'on a placé dans 3 tubes et auquel on a rajouté de l'eau)
Cependant, un 4eme tube ne contenant que de l'eau a également été associé au réactif de bradford. S'agit-il d'un tube témoin? Et si oui quel est son intéret (vérifier que l'eau n'induit pas une variation de couleur)

merci pour vos réponses et bonne fin de soirée
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[invite84e98f3f]

bonsoir tout le monde,

j'ai une question concernant le test de bradford que j'ai du effectué lord d'un tp de biochimie

le principe est le suivant : on a 3 solutions dont une solution d'acides nucléiques que l'on soumet au réactif de bradford dont le but est la mise en evidence de protéines (en présence de protéines il vire au bleu)

ainsi, dans ma solution protéique on observe bien une coloration bleue. Cependant, on observe également une légère teinte bleue au niveau de ma solution d'acides nucléiques. Par conséquent j'aurai souhaité savoir quels protéines pourraient être associées à ces acides et dont présentes dans ma solution.

De plus, le test de bradford a été effectué sur 3 solutions ( une solution de glucide, de protéines et d'acides nucléiques que l'on a placé dans 3 tubes et auquel on a rajouté de l'eau)
Cependant, un 4eme tube ne contenant que de l'eau a également été associé au réactif de bradford. S'agit-il d'un tube témoin? Et si oui quel est son intéret (vérifier que l'eau n'induit pas une variation de couleur)

merci pour vos réponses et bonne fin de soirée

salut,
les acides nuléiques peuvent être associés à des histones, ils ont surement été purifiés avant et c'est pour celà qe t'as une légère coloration peu intense, c'est les protéines qui subsistent aprés purif (enfin je crois, si je me trompe, d'autres le rectifiront surement).

le 4ème tube est en effet un témoin. tu testes l'absorbance du réactif de Bradford dilué car dans tous les échantillons que tu as testé, t'as rajouté de l'eau donc tu as dilué ton réactif.

bon courge, si t'as d'autres questions, n'hésite pas

[invitead95ec9b]

merci pour ta réponse
par contre je ne comprends pas le parallèle avec l'absorbance. Que pourrait engendrer la dilution du réactif de bradford?

[invite17a570c1]

Bonsoir,

Je dirais plutôt que l'eau pure (enfin, on espère qu'elle est pure...) sert de témoin négatif. Il s'agit de vérifier que le Bradford se lie vraiment spécifiquement aux protéines présentes dans ton tube et non pas à l'eau que tu as mis pour les y contenir. Il faut vraiment bien réfléchir à cette histoire de l'eau : pourquoi on ne te fait pas mettre du Bradford dans du tampon genre TBE ou autre, mais dans de l'eau?

Le fait que ton mélange d'acides nucléiques devient bleuâtre après l'ajout de Bradford signifie que très probablement tu as des histones qui sont toujours présentes en association avec les acides nucléiques. C'est l'hypothèse la plus probable étant donné que le bleu de Coomassie contenu dans le réactif de Bradford se complexe préférentiellement avec les chaînes latérales des acides aminés basiques (Lys, Arg). Les histones étant des protéines basiques... Tu as l'explication

Essaie avec ces explications d'ordonner ton expérience dans un ordre logique : si je veux tester quelque chose (=j'ai une hypothèse de départ), je fais quoi? Je le teste, évidemment , mais je le compare à quelque chose de sûr : c'est mon témoin. Positif si je veux prouver que ça marche exactement avec et négatif si je veux prouver que justement avec ça rien ne se passe. Tu ne peux pas analyser une expérience sans avoir une idée très claire de tes contrôles

Bonne soirée et n'hésite pas à reposer des questions, si tu en as, la biochimie est très vicieuse et faut bien suivre en permanence.

Cordialement,

[A voir en vidéo sur Futura]