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Q PCR - méthode de quantification relative



  1. #1
    nina340

    Lightbulb Q PCR - méthode de quantification relative

    Bonjour à tous,

    voilà j'arrive à calculer le rapport relatif mais... je ne comprends pas le résultat.
    Mes données :
    Sample | Hsp70 | Gène de ménage
    __ A ____ 22.1 ____ 24.9 _____
    __ B ____ 27.6 ____ 24.8 _____


    E(Hsp70) ^ CtHsp70 (échA) - CtHsp70 (échB) x E(Actine) ^ CtActine(échB) - CtActine (échA) = 33.2

    ma question est, comment interpréter ce chiffre ?
    Le gène Hsp70 est exprimé 33 fois plus chez l'individu B que chez le A??

    Merci,

    -----


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  3. #2
    Flyingbike

    Re : Q PCR - méthode de quantification relative

    Ca doit être a peu près ce rapport, mais c'est l'inverse. Un Ct plus petit = une expression plus forte. Donc plus chez le A que chez le B

  4. #3
    kamor

    Re : Q PCR - méthode de quantification relative

    Oui c'est ça.
    Il ne faut pas oublier que chaque écart d'un Ct correspond à une différence de concentration de 2.
    2^5 = 32. Avec la correction apportée par le gène de ménage ça colle.

  5. #4
    nina340

    Thumbs up Re : Q PCR - méthode de quantification relative

    D'accord merci.
    Donc si je comprends bien on compare l'expression du gène recherché avec l'expression du même gène chez un autre individu???
    (on ne compare pas l'expression du gène recherché avec l'expression du gène de ménage chez le même individu??)

  6. #5
    kamor

    Re : Q PCR - méthode de quantification relative

    Le gène de ménage est votre témoin. Le problème avec l'ARN est que les quantités récupérées peuvent varier en fonction de beaucoup de paramètres. Pour être sur que le seul paramètre qu'on mesure soit celui de l'expression de ce gène, on le pondère par ce qu'on appelle "un gène de ménage" autrement dit un gène exprimé tout le temps dans les cellules à des taux constants car indispensables à la cellule pour son bon fonctionnement. L'exemple classique est les ARNr
    Vous ne le comparez qu'au gène de ménage que pour pondérer les éventuels variations non liés à l'expression.

  7. A voir en vidéo sur Futura
  8. #6
    nina340

    Re : Q PCR - méthode de quantification relative

    D'accord j'ai compris
    merci beaucoup

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