Q PCR - méthode de quantification relative
Bonjour à tous,
voilà j'arrive à calculer le rapport relatif mais... je ne comprends pas le résultat.
Mes données :
Sample | Hsp70 | Gène de ménage
__ A ____ 22.1 ____ 24.9 _____
__ B ____ 27.6 ____ 24.8 _____
E(Hsp70) ^ CtHsp70 (échA) - CtHsp70 (échB) x E(Actine) ^ CtActine(échB) - CtActine (échA) = 33.2
ma question est, comment interpréter ce chiffre ?
Le gène Hsp70 est exprimé 33 fois plus chez l'individu B que chez le A??
Merci,
Ca doit être a peu près ce rapport, mais c'est l'inverse. Un Ct plus petit = une expression plus forte. Donc plus chez le A que chez le B
Oui c'est ça.
Il ne faut pas oublier que chaque écart d'un Ct correspond à une différence de concentration de 2.
2^5 = 32. Avec la correction apportée par le gène de ménage ça colle.
Re : Q PCR - méthode de quantification relative
D'accord merci.
Donc si je comprends bien on compare l'expression du gène recherché avec l'expression du même gène chez un autre individu???
(on ne compare pas l'expression du gène recherché avec l'expression du gène de ménage chez le même individu??)
Le gène de ménage est votre témoin. Le problème avec l'ARN est que les quantités récupérées peuvent varier en fonction de beaucoup de paramètres. Pour être sur que le seul paramètre qu'on mesure soit celui de l'expression de ce gène, on le pondère par ce qu'on appelle "un gène de ménage" autrement dit un gène exprimé tout le temps dans les cellules à des taux constants car indispensables à la cellule pour son bon fonctionnement. L'exemple classique est les ARNr
Vous ne le comparez qu'au gène de ménage que pour pondérer les éventuels variations non liés à l'expression.
D'accord j'ai compris
merci beaucoup
