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Préparation gélose Chapman (mannitol)



  1. #1
    KayF

    Préparation gélose Chapman (mannitol)


    ------

    Bonsoir !

    Je cherche à préparer une gélose Chapman (pour tester la présence de Staph aureus), mais pour ça il me manque du mannitol !
    J'ai tout le reste, mais j'avoue que le mannitol me pose problème, j'ai beaucoup cherché sur internet...c'est le néan!...en pharmacie, pareil, le seul médicament 100% mannitol est retiré de la vente depuis 2008^^...

    Bref, si quelqu'un connait un moyen de s'en procurer, je suis preneur!

    PS: sa va en faire rire plus d'un, j'ai utilisé le mannitol contenu dans des chewing gum sans sucre pour essayer (je msuis dis "on sait jamais" ^^)...mais j'ai bêtement oublié qu'il y avait aussi de l'acide citrique dedans (entre autres) mdr...bref je suppose que les cultures ne donneront rien !?

    Merci d'avance, bonne soirée

    -----

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  4. #2
    kamor

    Re : Préparation gélose Chapman (mannitol)

    Si vous êtes dans un labo, vous pourrez commander ça auprès de n'importe quel fournisseur (ou presque) Je ne sais plus où on le commande dans mon labo, mais ce n'est pas un produit très dur à obtenir.

  5. #3
    KayF

    Re : Préparation gélose Chapman (mannitol)

    Bonjour merci pour la reponse rapide!
    Mais jme rend compte que je n'ai pas precisé que j'etais étudiant en 3eme année de science^^...du coup pas de labo

  6. #4
    KayF

    Re : Préparation gélose Chapman (mannitol)

    Et le seul site que j'ai trouvé, est un site hollandais douteux ou il vendent des graines de cannabis mdr... Ce qui me gène surtout c'est le moyen de paiement par virement bancaire...

    Sinon est-il possible que mes milieux aient marchés!? Je distingue des colonies, certaines blanches, et d'autres semble entourées d'un halo orange ! Staph. aureus pour les oranges ?
    (Sachant que ma gélose est jaune-orangée du fait de mélange acide citrique/rouge de phénol ^^)

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  8. #5
    kamor

    Re : Préparation gélose Chapman (mannitol)

    Mais de mémoire, VRBL n'est pas spécifique des Staph aureus, je m'en servais pour des bactéries lactiques.

    Et ...
    où avez vous trouvé du crystal violet ? (Enfin c'est le seul constituant dont je me souvienne et dont l'approvisionnement hors labo me parait impossible, mais il ne doit pas être le seul).
    Avez vous incubé vos géloses à 30°C ? Sans cela vous avez aussi d'autres bactéries qui ont poussé, surtout s'il n'y a pas de Crystal violet.
    Dernière modification par kamor ; 14/11/2011 à 19h53.

  9. #6
    KayF

    Re : Préparation gélose Chapman (mannitol)

    Oula oula !
    Non non, je n'ai jamais parlé de milieu VRBL (que je ne connais même pas):
    - J'ai coulé 2 milieux Chapman, sélectifs des bactéries halophiles, et plus particulièrement, fermentant le mannitol (si jamais on a réussit à mettre du mannitol dedans mdr!)

    PS: Après rapide recherche sur internet, le crystal violet c'est bien du violet de gentiane? si c'est le cas, je ne vois pas le problème pour s'en procurer (kit de coloration GRAM).

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  11. #7
    kamor

    Re : Préparation gélose Chapman (mannitol)

    Non pardon, j'étais sur une autre discussion en même temps, raison de mon erreur.
    Mais Staph fermente le mannitol. Donc n'ayant pas ce caractère sélectif, qui doit de plus permettre une coloration particulière par acidification du milieu, alors que le votre est déjà acide (si j'ai bien compris), vous aurez une colonie. Après quelle forme et quelle couleur, impossible à deviner. Surtout si la température d'incubation n'est pas respectée. Et encore plus si vous n'avez pas mis de violet de gentiane qui inhiberait une partie de la flore interférante.
    je viens d'apprendre qu'un kit de coloration de GRAM est facile à se procurer, ah bon. J'ai du mal à voir l'intérêt immédiat pour le grand public quand même.

    Pour le mannitol pur, essayez peut être avec un prof de microbio sympa, il pourra peut être vous dépanner, sinon je ne vois pas trop.

  12. #8
    KayF

    Re : Préparation gélose Chapman (mannitol)

    J'ai dû me planter aussi, des colorants pour Gram sa doit pas se croiser à tous les coins de rue...

    Ah mince, j'avoue que je ne pensais pas que la température d'incubation pouvais influer sur leur développement autrement qu'au niveau de la vitesse de croissance. Du coup, la méthode "près du radiateur" n'est pas 100% fiable

    Merci du conseil pour le prof, j’essaierais peut-être à l'occasion mais j'ai pas trop de contact en microbio (ce n'est pas mon parcours).

    Bref bref, bon bah je pense qu'on se contentera du résultat qu'on a ^^ à savoir que sur 4 prélèvements, 1 échantillon forme des colonies oranges, les autres sont blanches!

  13. #9
    kamor

    Re : Préparation gélose Chapman (mannitol)

    En fait, ça peut modifier les formes ou couleurs de colonie, suivant les enzymes mises en jeu (certaines ne sont activées qu'à partir d'une certaine température).
    L'autre importance de la température est qu'elle peut avoir un effet sélectif. Les microorganismes ont tous un optimum de température, plus tu t'en approches plus elles pousseront vite. Le problème est que si tu t'en éloignes elles sont défavorisées, et d'autres bactéries, avec un optimum de température plus bas, pourraient se développer au même rythme ou plus rapidement que tes Staph.
    Donc à moins que tu acceptes de mourrir de chaud dans ton appart, quelque chose me dit que tu ne les incubes pas à la bonne température

    Pour le kit de GRAM, je ne sais pas, mais à part dans un labo, j'ai du mal à voir un intérêt immédiat, ainsi qu'une utilisation aisée de ça par M. tout le monde.

    Si tu veux quand même retenter, pour le violet de gentiane, il semblerait que tu puisses en trouver dans certaines pharmacies, portées sur l'homéopathie. Si jamais ta pharmacie en a, ne t'étonne pas du regard étrange du pharmacien, il semblerait que son utilisation la plus importante soit contre les candidoses des femmes durant la lactation

  14. #10
    KayF

    Re : Préparation gélose Chapman (mannitol)

    Snif, non effectivement, elles doivent incuber à 25°+-2 actuellement...
    Dommage que les étudiants puissent pas accéder à ce genre de matos quand même. Bon c'est vrai que le marché serait assez restreint :/ tout le monde n'est pas curieux comme moi.

    Bref, si un laborantin passe dans le coin, je veux bien lui acheter du mannitol ! ^^ et une étuve de poche ahaha...

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