Triose phosphate deshydrogénase

[invite5e4e2baa]

Bonjour,

J'ai un exercice d'enzymologie et je ne sais pas par où commencer.Pourriez vous m'aider svp?merci beaucoup

La Triose –phosphate-deshydrogénase catalyse la réaction suivante :

Glycéraldehyde 3 phosphate -> NAD+ et HPO3^2- transformé en NADH -> Glycérate 1,3 bisphosphate

L’activité de l’enzyme est suivie par mesure de l’absorbance à 340 nm du NADH formé au
cours de la réaction.
1. Comment peut-on déduire de ces absorbances la concentration en NADH formé.

Concentration en Absorbance (cuve l=1 cm)Mesures effectuées au temps t=10 min
Glyceraldehyde 3 phosphate
Millimole L-1 Sans Inhibiteur Avec Inhibiteur Salicylate,40mmole.L-1

1,5 0,21 0,08
2 0,25 0,10
3 0,28 0,12
4 0,33 0,13
8 0,44 0,16
16 0,4 0,18





2. Calculer le Km en mmol.L-1 et la Vmax en mmol.L-1min-1 sachant que le temps
d’incubation est de 10 minutes. On utilisera la représentation d’Eadie-Hofstee.

On a déterminé l’effet du salicylate de sodium sur la réaction et on a obtenu les résultats
reportés dans le tableau ci-dessus.

3. Déterminer graphiquement le type d’inhibition.

Donnée : ε(340nm) du NADH = 6,23 103 mol.-1 L. cm-1
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[Flyingbike]

Bonjour,

J'ai un exercice d'enzymologie et je ne sais pas par où commencer.Pourriez vous m'aider svp?merci beaucoup

Bonjour

Tu peux commencer par regarder la loi de Beer-Lambert qui devrait te permettre de répondre a la première question

[invite5e4e2baa]

J'y avais pensé mais vue qu'elle n'y était pas dans mon cours,je pensais pas qu'il fallait l'utiliser (mais sa doit être considéré comme connue)

merci

[invite5e4e2baa]

loi de beer lambert : A=elC

Si on prend une valeur de l'absorbance A dans le tableau par exemple A=0,21 et l=1cm.On doit chercher la concentration C mais on a pas "e"ou a moins que C c'est la concentration en glyceraldehyde 3 phosphate et que l'on trouve "e" puis "e" a la meme valeur pour ensuite calculer [NADH]?

[A voir en vidéo sur Futura]

[invite5e4e2baa]

Help please

[invite5e4e2baa]

Pourriez vous m'aider svp je n'ai toujours pas avancé...

[invite8d5f6081]

bonjour !

je coince aussi sur cette exercice ...

Des pistes ?

pour la question 1 ) j'ai di qu'il fallait construire la courbe d'étalonnage et déterminer la concentration inconnu par simple mesure de l'absorbance de NADH et report sur le graphe A=f(c) ...
Mais je n'ai pas l'absorbance de NADH

merci

[invite2c1ab998]

e est le coefficient d'extinction molaire de l'éspèce étudié, c'est une constante qui en plus t'es donné, c'est ton epsilon...

[invite8d5f6081]

oui j'ai bien e mais quelle est la méthode ?

merci

[invite2c1ab998]

il suffit de tracer la courbe A=f(c)=e*l*c où c est la concentration de NADH. tu peut faire cela avec un tableur( exel ou calculatrice graphique)

[invite8d5f6081]

en fait les données sont les concentrations et les absorbance du glyceraldehyde 3 phosphate . comment a partir de ça j'ai la concentration en NADH ?

[invite2c1ab998]

pourais tu ajouter une image de l'énnoncé stp car la c'est pas claire

[invite8d5f6081]

Voici en piece jointe l'énoncé de l'exercice

[invite2c1ab998]

d'apres la loi de beer-lambert tu as: A=e*l*c donc c=A/(e*l) ici la concentration du glyceraldehyde est inutile pourr le calcul de la concentrtion en NADH car il est bien marqué que ce sont les valeur d'absorption pour le NADH

[invite8d5f6081]

Ah merci je comprend mieux maintenant j'ai lu trop vite l'énoncé ...
pourriez vous me donner des indications pour la suite je ne vois vraiment pas comment faire , en faite je n'arrive pas à mettre en relation les seules info donnée pour obtenir Km et Vmax ...

Merci !

[invite2c1ab998]

je suis désolé mais mes connaissances s’arrête ici sur ce sujet car je n'ai jamais fait de biochimie.
bonne continuation

[invite8d5f6081]

merci quand même

si quelqu'un à des pistes à me proposer , c'est toujours d'actualité

[Flyingbike]

la formule V=Vmax . [S] / Km + [S] (dite de Michaelis Menten) devrait vous aider...

[invite8d5f6081]

En fait ce qui me pose problème c'est qu'au niveau "donnée "on a que des concentrations et des absorbance .... Les vitesses ? Comment les déterminer ? La seul chose en rapport avec le temps c'est la durée d'incubation .
Donc cette formule oui mais j'ai trop d'inconnu ...

[Flyingbike]

ben la vitesse est donnée par la variation de concentration de substrat ou de produit par unité de temps

[invite8d5f6081]

donc dc/dt puis j'utilise la formule A=e l c .... mais du coup se serait une détermination graphique non ?

[invite8d5f6081]

je bloque vraiment sur cette partie ce qui m'empêche d'avancer ... quelqu'un pourrais m'aider ?? J'essaye vraiment de trouver des solutions je parcours les exos et les cours un peu de partout mais rien ...

j'ai posé A=e l c

Vinitial=dc/dt=dA/dt *1/el

sachant que dans le modele de Eadie Hofstee en represente Vi en fonction de Vi/c (concentration en substrat )

mon problème: l'exercice nous donne seulement le temps d'incubation ...comment trouver les valeurs de la vitesse initial ???
Comment dois-je procéder ?
(c'est très important pour moi pour réussir mon examen du semestre ! )

merci infiniment !

[invite2e948a63]

Bonjour a tous ! Jai moi aussi a faire cet exercice mais on aura jamais la correction en gros cest juste pour nous entrainer . Je suis en L1 . Pour la question 1 comme ils demandent comment on peut déduire des absorbances la concentration en nadh je pensais juste parler de la loi de beer Lambert ... Mais estce que sa suffit comme réponse ?
Pour la question 2 je sais ce qu'est la représentation d'eadie hofstee ( voir photo ) mais le soucis c'est que je vois pas quoi mettre/ comment trouver ce qui sera en ordonné ( qui est v ). En abscisse cest bien les mesures sans inhibiteur puis avec ?
Merci a tous par avance