Bonjour,
Je suis chargée d'imaginer un protocole visant à déterminer la réaction immunitaire d'un poisson (D. labrax) face à une infection de parasites branchiaux (D. aequans). J'ai pensé réaliser en premier un test ELISA pour savoir si le poisson exprime des anticorps anti-parasite dans son sang. Pensez vous que le protocole suivant soit cohérent??
"La détection des anticorps se fait par test ELISA. Le sang des poissons est récupéré par la veine caudale et mis à coaguler une nuit à 4°C. Le sérum est ensuite récupéré et dilué. Les antigènes proviennent des parasites. L’anticorps de détection est une immunoglobuline anti-loup obtenue en injectant des antigènes de loup dans un lapin. De la même façon, l’anticorps secondaire est une immunoglobine anti-lapin obtenue en injectant des antigènes de lapin dans une chèvre (anticorps disponibles dans le commerce). Cet anticorps secondaire est couplé à une enzyme peroxydase obtenue chez le radis ou le raifort.
Les puits sont ensuite rincés : si l’anticorps secondaire n’est pas fixé, il sera éliminé. On ajoute ensuite de l’eau oxygénée, substrat de l’enzyme. Si l’enzyme est présente, l’eau oxygénée sera transformée en deux molécules d’eau et la couleur de la solution sera modifiée. Le dosage se fait par spectrophotométrie."
Merci
-----