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Recherche marqueur vital pour noyaux de myoblastes



  1. #1
    LilouBZH

    Recherche marqueur vital pour noyaux de myoblastes

    Bonjour à toutes et toutes !

    Je souhaite créer une lignée de myoblastes ayant les noyaux colorés. J'ai essayé de les transfecter avec un plasmide qui colore les histones en vert (GFP) mais il ne me reste aucune cellule vivante.

    Avez vous d'autres idées concernant des marqueurs pour noyaux ? Il faut que ce soient des marqueurs vitaux et que la coloration dure dans le temps ?

    J'ai vu des articles sur le fluoro-gold ? est ce que c'est commercialisable ?

    Merci d'avance !

    -----


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  3. #2
    Flyingbike

    Re : Recherche marqueur vital pour noyaux de myoblastes

    un colorant et une lignée ça n'aura pas du tout la même implication. Quel est le but ?

    POur la GFP, elle est fusionnée aux histones ? Si oui ça ne m'étonne pas qu'elles crèvent.

  4. #3
    LilouBZH

    Re : Recherche marqueur vital pour noyaux de myoblastes

    En fait le but est de colorer les noyaux avant acquisition d'images ! Donc pas grave pour les lignées (c'était l'idée de départ) !

  5. #4
    Flyingbike

    Re : Recherche marqueur vital pour noyaux de myoblastes

    sur cellules vivantes ? des images en fluorescence ?

    pourquoi pas le hoechst ?

  6. #5
    LilouBZH

    Re : Recherche marqueur vital pour noyaux de myoblastes

    Oui, c'est sur cellules vivantes.

    De plus, il faut que le colorant corresponde au filtre de la GFP;

    j'ai trouvé le SYTO16, toutes ses caractéristiques semblent correspondre à mes exigences.

    Merci quand même pour ta réponse .

  7. A voir en vidéo sur Futura
  8. #6
    LilouBZH

    Re : Recherche marqueur vital pour noyaux de myoblastes

    Re-bonjour à toutes et tous !

    je ne trouve pas d'infos sur la stabilité de la fluorescence du SYTO16 dans le temps? est ce que quelqu'un à une idée ?

    Merci beaucoup

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  10. #7
    Flyingbike

    Re : Recherche marqueur vital pour noyaux de myoblastes

    je ne sais pas si l'info existe. En tout cas j'ai vu que invitrogen pouvait donner des échantillons pour tester.

  11. #8
    LilouBZH

    Re : Recherche marqueur vital pour noyaux de myoblastes

    Oui j'ai vu le kit où il y a pleins d'échantillons de SYTO afin de pouvoir tester les différents spectres d'absorption et d'émission.

    J'ai peut être trouvé une autre solution que le colorant vital et que le plasmide : Le BrdU !

    Maintenant il me reste à savoir si le protocole de fixation par l'éthanol et la glycine n'affecte pas les protéines MCherry ?

    Des réponses ?

  12. #9
    Flyingbike

    Re : Recherche marqueur vital pour noyaux de myoblastes

    le BrdU ? sur des cellules vivantes ?

  13. #10
    LilouBZH

    Re : Recherche marqueur vital pour noyaux de myoblastes

    oui sur des cellules vivantes... que l'on fixe après 24h !

  14. #11
    Flyingbike

    Re : Recherche marqueur vital pour noyaux de myoblastes

    mais ça ne marquera que les cellules s'étant divisées en présence de BrdU. C'est un analogue de thymidine, il ne marque pas par exemple les cellules hors phase S.

    Et puis après il faut effectivement fixer, perméabiliser, anticorps, etc...

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